乌骨鸡黑色素的降解及其结构片段的分离和鉴定

乌骨鸡是江西地方特色资源和道地药材，有悠久的滋补、药用历史，乌骨鸡的特殊性就在于其体内富含的黑色素，乌骨鸡黑色素是体现乌骨鸡滋补药用功效的重要物质基础。但目前乌骨鸡黑色素的化学组成和结构还不清楚。本项目拟研究较温和的氧化降解方法对乌骨鸡黑色素进行控制性的降解，断裂乌骨鸡黑色素聚合结构，获得可溶性的降解产物。再通过对含有主要结构片段信息的不同程度降解产物间的生源关系分析，找出乌骨鸡黑色素的主要结构片段，并对其进行分离、纯化和鉴定，获得乌骨鸡黑色素的结构组成信息，为进一步研究乌骨鸡黑色素的一级化学结构和构效关系提供基础。

本项目研究了乌骨鸡黑色素的提取精制方法，通过“脱脂-酶解-酸解”三步精制法获得了纯净的乌骨鸡黑色素，其在透射电镜下成形态完整的椭球形颗粒，边缘清晰平滑，无被破坏的痕迹，红外光谱显示乌骨鸡黑色素具有酰胺、脂肪族结构，元素分析显示 C、H、N、S元素质量分数分别为59.18%、3.28%、9.09%、1.79%；. 研究了多种乌骨鸡黑色素氧化降解方法及其降解规律，发现乌骨鸡黑色素可溶性的降解产物的组成复杂，产物种类与降解条件密切相关，主要产物有氨基酸、脂类、有机酸、胺类等物质；建立了H2O2控速降解法，通过控制H2O2添加速度和添加量，调控乌骨鸡黑色素降解反应进程，可获得收率稳定的可溶性降解产物，适于黑色素结构中有机酸分析，建立了条件温和的NH4OH-H2O2 降解法，适于黑色素结构中氨基酸分析，通过NH4OH-H2O2降解-盐酸水解法，发现精制黑色素结构中存在大量蛋白质，精制黑色素外周连接和内部结构蛋白水解后氨基酸分别约占黑色素质量的24%、14％，亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、天门冬氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸及苯丙氨酸是存在于黑色素结构中的8种主要氨基酸，占总氨基酸的87.1％，亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸是贯穿在黑色素结构内外的三种主要氨基酸，在周围连接蛋白中占47.13％，在内部结构蛋白中占58.4％；. 综合各种降解方法，断裂乌骨鸡黑色素聚合结构，获得可溶性的降解产物，再对其进行分离、纯化和鉴定，发现：乌骨鸡黑色素碳酸钾- H2O2降解产物中存在胆固醇；K2CO3 - H2O2降解产物中存在辛二酸、壬二酸、庚二酸、戊二酸、己二酸、丁二酸、十六酸等20多种不同的脂肪酸成分; NaOH-H2O2降解产物中存在碳链长度为C14-C33的烷烃组分，烷烃含量随H2O2加入量的增加而增加，随降解时间的增加而增加，降解至20小时，烷烃含量最高；采用丹黄酰氯衍生法结合结晶分离法，在NaOH-H2O2降解产物中分离并鉴定出丹磺酰胺，表明降解产物中含有游离-NH3。. 通过NaOH-H2O2控速降解转化乌骨鸡黑色素结构中S元素，分离、鉴定转化产物结晶D-1，发现乌骨鸡黑色素结构中含S元素1.79%，经NaOH-H2O2法降解，有34.9%的S元素转化成了硫酸盐，推测中乌骨鸡黑色素结构中S元素可能以硫醚形式存在。