肾脏进行性纤维化发生新机制：MicroRNA的调控作用及防治新靶点研究

TGF-β/Smad信号通路是介导肾脏纤维化发生发展的主要机制。本课题组前期研究结果表明TGF-β通过Smad3和MAPK分别上调miR-192和miR-491-5p表达促进肾脏纤维化，提示TGF-β可通过Smads依赖和非依赖信号通路调控miRNAs表达介导肾脏纤维化。本项目拟利用新一代芯片技术获得肾脏纤维化相关的miRNA差异表达谱，并预测差异miRNA的靶基因，明确其与靶基因结合的位点；利用染色体免疫共沉淀和点突变技术确定TGF-β信号通路下游转录因子与miRNA启动子结合的位点；应用超声微泡转染miRNA拟似物或抑制物，探讨其在防治肾脏纤维化中的作用，并通过体内外研究证实TGF-β调控miRNAs介导肾脏纤维化的机制；前瞻性观察差异miRNA与慢性肾脏病临床及病理的关联性。本研究将有助于揭示miRNA调控肾脏纤维化的分子机制，为研制防治肾脏纤维化及相关疾病的靶向药物提供科学依据。

TGF-β/Smad信号通路是介导肾脏纤维化发生发展的主要机制。本项目分别利用新一代芯片以及高通量RNA测序技术获得慢性肾脏病患者及动物模型肾损伤相关的非编码RNA差异表达谱。芯片结果显示,相对于正常肾组织,三个CKD患者组中分别发现40个共同上调、76个共同下调的miRNA，通过生物信息学分析预测差异miRNA的靶基因并进一步的通过体内、外实验明确其与靶基因结合的位点。另外，我们分别建立Smad3 WT/KO小鼠单侧输尿管结扎模型及抗肾小球基底膜肾炎模型，收集肾组织进行全转录本RNA测序，寻找差异非编码RNA的下游信号分子。结合CKD模型miRNA芯片检测结果和全转录组的表达分析，将更加有利于我们找出在肾脏纤维化以及CKD发病过程中发挥重要作用的非编码RNA，靶基因以及其作用的信号通路。本研究将有助于揭示非编码RNA调控肾脏纤维化的分子机制，为研制防治肾脏纤维化及相关疾病的靶向药物提供科学依据。