二酰甘油激酶θ参与非酒精性脂肪肝的发生与缓解过程中的分子机制

Diacylglycerol induced triglycerides(TAG)accumulation and insulin resistance are cosidered as the main risk factor of Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). We previously found the bile acids reduced hepatic DAG and glucose concentration through a Diacylglycerol Kinasesθ (DGKθ)-dependent pathway. Therefore, DGKθ may be invloved in NAFLD pathogenesis and treatment. Here, we will utilize Cas9-sgRNA to knockout hepatic DGKθ in mice model and characterize the effect of silencing DGKθ on the hepatic steatosis and insulin sensitivity. Using genome-wide microarray analysis and molecular techonology, we will further identify the target genes of DGKθ involved in glucose and lipid metabolism. Finally, we will access the role of DGKθ in the bile acids improvement on NAFLD. The importance and novelty of our study is the possibility to identify the role of DGKθ in the mechanism of NAFLD, and proposes DGKθ as a new drug target for NAFLD treatment.

由DAG来源的三酰甘油（TAG）的蓄积和胰岛素抵抗是非酒精性脂肪肝（NAFLD）发生的重要诱因，但目前对NAFLAD的发病机制并不十分清楚。我们前期发现，在肝细胞中胆汁酸可通过激活DGKθ有效降低二酰甘油和葡萄糖的浓度，推测DGKθ可能在NAFLD发生和缓解过程中发挥着关键性的作用。本课题拟采用靶向基因组编辑技术建立针对 DGKθ基因敲除的小鼠肝癌Hepa1-6细胞系。通过分析所建细胞模型中糖、脂代谢相关生化指标的以及相关调节基因的变化，以确定DGKθ在NAFLD发生过程中的作用，为阐明DGKθ在NAFLD发生和缓解过程中的调控分子机制及NAFLD的预防与治疗奠定基础。

DAG诱导的三酰甘油（TAG）的蓄积和胰岛素抵抗是非酒精性脂肪肝（NAFLD）发生的重要诱因，但目前对NAFLAD的发病机制并不十分清楚。二酰甘油(DAG)作为二酰甘油激酶θ（DGKθ)的底物，与脂类代谢密切相关。本研究主要采用靶向基因组编辑技术建立针对 DGKθ基因敲除的人肝癌HepG2细胞系，并分析所建细胞模型中糖、脂代谢相关生化指标的以及相关调节基因的变化，确定DGKθ在NAFLD发生过程中的作用。目前，1.已获得了4对具有高活性切割效率的针对人的DGKθ的Cas9-sgRNA，并成功构建了高容量腺病毒载体和打靶载体。2. 成功建立DGKθ敲除的HepG2细胞系，实验结果表明，DGKθ基因敲除的HepG2细胞存在显著脂质蓄积，其DAG含量显著性升高，PA含量显著性降低。同时DGKθ基因敲除的HepG2细胞的脂代谢相关因子FAS, PPARγ以及SREBP-1c的mRNA及蛋白水平均显著性上升。糖代谢相关因子mTOR和AKT1的蛋白磷酸化水平均显著性降低。胰岛素抵抗相关因子PKCε的（S729）磷酸化显著性升高，而IRS-1（Y632）蛋白磷酸化水平均显著性降低，上述实验结果表明DGKθ可以调控肝脏糖脂代谢中的关键因子。项目执行期间，发表SCI文章3篇，其中SCI 2区 文章1篇，SCI4区 文章2篇，SCI 4区文章在投1篇，发表核心文章1篇。培养在读硕士研究生1名。通过本研究，确定了DGKθ是糖脂双调控机制的潜在分子靶标子，为NAFLD的新的药物治疗靶点筛选及其预防奠定基础，具有重要的理论意义和医学应用价值。