基于嗜酸性粒细胞凋亡失衡的温通方干预支气管哮喘的机制研究

Chronic airway inflammation plays an important role in the pathological mechanism of bronchial asthma. Eosinophil (EOS) is the key effector cell that mediated inflammation. The EOS apoptosis imbalance is the basis of chronic inflammation persistence. On the basis of such elements, the project chooses the oxidative stress in the rat model of BA ,and test EOS infiltration, aggregation, apoptosis in peripheral blood, BALF and lung tissue firstly, that around the EOS apoptosis imbalance. On this basis, the study launches overall dynamic research of multiple ways, levels and angles, tests the validity of Wentong prescription adjusting EOS apoptosis imbalance by promoting or inducing EOS apoptosis, and clarifies that as an important mechanism in treating BA.The study overall establishes the experimental evidence and investigates the mechanism the prescription adjusting EOS apoptosis imbalance to treat BA by promoting or inducing EOS apoptosis firstly from the aspect of EOS apoptosis imbalance; it explores a new way for TCM to promote EOS apoptosis in treating BA.

项目基于气道慢性炎症是支气管哮喘（bronchial asthma，BA）病理机制的枢纽环节，嗜酸性粒细胞（EOS）是介导炎症的关键效应细胞，EOS凋亡失衡是慢性炎症迁延的基础，调控EOS凋亡失衡是药物遏止慢性炎症治疗BA的瓶颈；选择哮喘大鼠氧化应激模型，围绕EOS凋亡失衡，首先观测外周血、支气管肺泡灌洗液、肺组织中EOS的浸润、聚集、凋亡状态；在此基础上从免疫组织化学、分子生物学等多层面，多方法、多角度全面在体动态研究，观察"温通方"促进或诱导EOS凋亡及调控EOS凋亡失衡影响BA气道慢性炎症的变化规律，验证"温通方"的优效性；最终明确"温通方"调控EOS凋亡失衡治疗BA的靶向、靶点。首次从EOS凋亡失衡的角度，建立"温通方"促进或诱导EOS细胞凋亡的实验证据，揭示其调控EOS凋亡失衡治疗BA的机制；开辟中医促进EOS凋亡治疗BA的新途径。

本研究基于调控EOS 凋亡失衡是药物抑制慢性炎症治疗BA 的瓶颈这一科学问题，选择哮喘大鼠氧化应激模型，围绕EOS凋亡失衡，比较观察了西药地塞米松、中药温通方（高、中、低剂量）调控EOS凋亡相关因子、受体、基因、蛋白的作用靶点及其机制。首次从EOS 凋亡失衡的角度，获得“温通方”促进或诱导EOS 细胞凋亡的实验证据，揭示了其调控EOS 凋亡失衡治疗BA 的机制；开辟了中医促进EOS 凋亡治疗BA 的新途径。. 研究表明，哮喘模型组大鼠在一般状况、肺功能检测及组织病理学检测等方面均可见明显变化，从而验证了哮喘氧化应激模型建立成功。通过对哮喘模型大鼠相关指标的考察，我们发现其存在着EOS凋亡失衡的病理表现，主要体现在：模型大鼠血、肺组织中EOS数量明显增多而EOS凋亡百分率明显降低；IL-3、IL-5、IL-13等抗EOS凋亡因子显著减少，而TGF-β、IFN-γ、IL-10等促EOS凋亡因子明显增多；模型组大鼠肺组织中具有诱导EOS凋亡作用的受体Siglec含量明显降低，而高表达于EOS的受体如CD30、CCR3等含量均可见明显升高；模型组大鼠肺组织中bcl2 mRNA、Eotaxin mRNA、TNF-a mRNA等基因以及活性蛋白rhSP-D含量可见明显升高，而Fas mRNA、Fasl mRNA含量可见明显降低。因此，我们推测在哮喘模型中存在着上述细胞因子、受体、基因及蛋白表达的失衡，从而抑制或促进了EOS的凋亡过程。. 比较地塞米松、温通方高剂量、温通方中剂量、温通方低剂量对哮喘模型大鼠的干预作用，发现其在减轻症状、促进EOS凋亡以及改善各项指标方面均有一定的作用。综合结果比较，温通方高剂量疗效较好，其效果与西药地塞米松组基本相当，且未见明显副反应；其次为中剂量组；而低剂量组在很多指标的改善方面未见明显效果，从一定程度体现了中药的量效关系。通过研究结果，我们推测：温通方能够调节血清、支气管肺泡灌洗液、肺组织中相关因子、受体、基因及蛋白表达的失衡，影响EOS凋亡，改善气道慢性炎症，从而治疗支气管哮喘。通过本研究，我们探讨了温通方的作用机制，为中药治疗支气管哮喘提供了靶向、靶点的新证据。