一个肺腺癌相关新lncRNA LOC100132354的生物学功能及其分子机制研究

Long chain of non-coding RNA (lncRNAs) involved in the mechanisms of development and occurrence of lung cancer, but studies of lncRNAs in lung cancer are still unclear. Our previous work demonstrated that LOC100132354 was significantly increased in lung adenocarcinoma and is closely associated with lymph node metastasis,suggesting that it may be a new lncRNA molecule of lung adenocarcinoma. While its biological function and molecular mechanism is unknown. The project intends to detect the level of LOC100132354 RNA and clinical data analysis and relationships, survival analysis and evaluation of its prognostic value in lung adenocarcinoma. In vitro experiments, A549 cell line is made for over-expression and LOC100132354 siRNA and observed the changes of biological behavior of tumor cell. LOC100132354 specific binding protein was obtained by RNA coprecipitation immunity technique and RNA-pulldown and the nude mouse model of lung cancer established to confirm LOC100132354 role. The work will systematically study and clarify biological function and molecular biological mechanisms of LOC100132354 and may provide a new target for the mechanisms of lung adenocarcinoma.

长链非编码RNA（lncRNAs）参与了肺癌的发生发展机制，但目前国内外对1ncRNA 在肺癌中的相关研究尚处于起步阶段。我们前期工作证实 lncRNA LOC100132354在肺腺癌组织中明显上调，且与淋巴结转移密切关联，推测其可能是肺腺癌新的关联lnRNA分子，但其生物学功能及分子机制未明。本项目拟检测肺腺癌组织LOC100132354水平及分析与临床资料关系，生存分析评价其在预后价值。体外实验以肺腺癌系A549 细胞株为研究基础，采用稳表达及siRNA 前后，观察对A549细胞肿瘤生物行为变化；通过 RNA-pulldown 和 RNA 免疫共沉淀技术以获得LOC100132354特异性结合蛋白；建立裸鼠肺癌模型来证实LOC100132354的作用；来系统性研究及阐明LOC100132354生物学功能及其分子生物学机制，该研究可能为肺癌的机制研究提供新的靶点。

LOC100132354 又称为LINC01512，前期证实了LOC100132354 在肺腺癌（LAD）中表达明显上调的一个lncRNA 分子，且表达水平与淋巴结转移密切相关，故LOC100132354可能在LAD的发生发展，乃至预后的一个起重要作用的新lncRNA分子，但机制未明。主要研究内容：1.分析LAD组织LOC100132354水平与临床资料、生存分析中的关系。2.对LOC100132354进行稳表达及RNA干扰前后，观察A549细胞的肿瘤学行为的变化。3.LOC100132354特异性结合蛋白质获得及验证。4.建立裸鼠肺癌模型。主要结果：1.表明LOC100132354 表达量LAD明显高于癌旁组织，淋巴结转移的LAD组明显高于未发生淋巴结转移组，IIIa 期表达水平明显高于Ia、Ib、IIa、IIb 期；生存分析显示高表达LOC100132354 LAD患者生存期较低表达LOC100132354 患者明显缩短。2.亚细胞定位结果显示LOC100132354定位于细胞核中；LOC100132354 siRNA 后的SPCA-1细胞增殖、迁移、侵袭、细胞克隆形成、细胞黏附能力和S 期及G2/M 期细胞均明显降低，而凋亡、G0/G1 期细胞显著增加。过表达LOC100132354 后A549细胞增殖、迁移、侵袭、细胞克隆形成、细胞黏附能力和S 期及G2/M 期细胞均明显升高，而凋亡、G0/G1期细胞显著降低。3. 裸鼠成瘤证实了LOC100132354 能增强裸鼠成瘤速度及肿瘤重量。4.通过RNA-pulldown 技术获得五个条带明显的蛋白，质谱分析发现一个位于33.5kd 位置的蛋白，证实为SET蛋白。结论：1.临床样本验证发现LOC100132354 为表达明显上调lncRNA 分子。2. LOC100132354 具有增强LAD细胞增殖、迁移、侵袭、黏附、克隆形成能力，降低凋亡的作用，动物实验提示LOC100132354 使裸鼠成瘤能力明显增强。3. RNA-pulldown 技术结合质谱分析提示SET 蛋白可能是LOC100132354 结合蛋白，并LOC100132354与SET蛋白可能共同在LAD中发挥作用。通过本项目研究，提示LOC100132354有望成为LAD的生物标志物和干预靶点。