"辛开苦降法"干预2型糖尿病IRS-2/ PI3-K通路介导的肝胰岛素抵抗的机制研究

胰岛素受体底物2/磷脂酰肌醇3激酶(IRS-2/PI3-K)介导肝脏胰岛素转导缺陷直接影响全身胰岛素抵抗(IR)。我们研究证实：辛开苦降方（开郁清胃颗粒）可减轻IR，该方一升一降，相反相成的治法与IRS-2低表达和IRS-3,4高表达的失衡状态相契合，但该方是否通过辛开和苦降法配合改善肝脏IR未见报道。本项目应用转基因Kkay 2型糖尿病（T2DM）模型，通过观察辛开苦降方及其拆方对胰岛素敏感指数、肝糖原含量的影响，探讨辛开和苦降法配伍的有效性。通过采用Western Blot、实时荧光定量PCR、ELISA等方法，从蛋白和基因水平检测辛开苦降方及其拆方对肝脏IRS-2及磷酸化形式、IRS-2调控途径中IRS-3,4和PI3-K及其磷酸化形式、胰岛素受体蛋白、游离脂肪酸的影响，多靶点、多层次的阐明辛开苦降方配伍机制与IRS-2及其调控蛋白的相关性，为中药治疗初发T2DM IR提供新思路。

2型糖尿病（T2DM）是危害严重的常见病，胰岛素抵抗(IR)是贯穿T2DM始终的关键病理环节。胰岛素受体底物2/磷脂酰肌醇3激酶(IRS-2/PI3-K)介导的肝脏胰岛素转导缺陷直接导致IR发生。本研究提出辛开苦降方的辛开和苦降配伍方法与肝脏IRS-2/PI3-K 信号通路的平衡状态相契合从而改善肝IR的病理假说。. 本课题应用高能量饮食将转基因Kkay小鼠成功诱导为T2DM模型，采用辛开苦降方及其拆方辛开方和苦降方干预后发现：辛开苦降方及其拆方均可改善小鼠整体精神状态，降低小鼠胰岛素浓度，增强胰岛素敏感指数，增加肝糖原含量，同时增强IRS-2及磷酸化形式的蛋白表达，抑制负性调节因子IRS-3,4蛋白表达，另外可改善肝组织病理损伤；辛开苦降方还能降低血清和肝脏甘油三酯水平，同时增强PI3-K及其磷酸化形式蛋白表达量及PI3-K mRNA的表达；苦降组还能小鼠血糖和血清甘油三酯水平。但辛开苦降方与辛开方和苦降方相比较，各指标均无显著差异。本研究同时观察了辛开苦降组剂量翻倍后的疗效，发现辛开苦降高剂量也能够提高血清胰岛素、胰岛素敏感指数、肝糖原含量，同时增加IRS2/PI3K通路相关的蛋白和基因表达，但是疗效与辛开苦降原剂量没有显著差异。辛开苦降高剂量还可以明显降低小鼠空腹血糖、总胆固醇水平、游离脂肪酸水平。. 本研究从整体-细胞-分子水平初步揭示了辛开苦降方治疗T2DM的疗效和作用机制，同时在一定程度上证实了辛开和苦降法配伍的有效性，为中药治疗初发T2DM IR提供新思路。. 本研究同时检测了胰腺组织炎症与凋亡相关因子IL-6、BCL-2、Bax和胰岛素受体InR的蛋白表达，免疫组化图像分析初步发现辛开苦降方可以减少促凋亡因子Bax表达，增加InR表达，具体数据仍在进一步分析中。本探索为进一步从胰腺β细胞凋亡方面研究该药改善胰岛功能的作用机理提供了基础。. 另外本课题还观察了芪白合剂（由黄芪和翻白草组成）对该模型小鼠胰岛素抵抗及其相关基因mRNA表达的影响，发现芪白合剂可改善小鼠胰岛素抵抗，提高肝组织PI3-K、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1（PGC-1）mRNA表达。