从肝论治阿尔茨海默病-黑逍遥散对其模型药靶部位影响的基因和蛋白质表达谱分析

基本信息
批准号:81060284
项目类别:地区科学基金项目
资助金额:25.00
负责人:吴红彦
学科分类:
依托单位:甘肃中医药大学
批准年份:2010
结题年份:2013
起止时间:2011-01-01 - 2013-12-31
项目状态: 已结题
项目参与者:张帆,李海龙,陈彻,吴建军,朱向东,王虎平
关键词:
阿尔茨海默病从肝论治逍遥散中药药靶基因蛋白质表达谱
结项摘要

本研究基于从肝论治AD的假说及前期药效学研究基础,进一步以Aβ1-40建立大鼠AD模型,以疏肝养血体现治肝之法的代表方黑逍遥散干预,测试学习记忆行为,并提取分离血清、脑脊液和海马组织标本,检测血清、脑组织SOD、MDA、LPO、GSH-Px、MAO和ChAT。抽提脑海马组织mRNA后用cDNA基因芯片杂交扫描,检测各组cy5、cy3荧光信号,以SNK-t检验方法比较各组数据,应用二项分布原理分析功能基因的表达差异。将海马和脑脊液的蛋白质进行2D电泳和凝胶图像分析,分析比较蛋白斑点差异,测算蛋白分子的等电点和相对分子量,获得基因和蛋白质表达谱并联合分析寻找差异位点,进一步印证从肝论治AD的科学有效性,探讨黑逍遥散的作用机制和药靶部位,以期为防治AD提供新的理论依据,为扩大传统古方新用,研究有效新药提供基础。

项目摘要

项目摘要:目的:观察黑逍遥散对Aβ25-35诱导AD 模型大鼠行为学、形态学、相关酶学的影响,并应用基因芯片和蛋白质质谱芯片技术发现黑逍遥散干预AD 模型大鼠的作用靶点,并对部分靶点和信号通路进行验证,从而探讨黑逍遥散防治AD的作用及其机制。方法:采用Aβ25-35海马区注射诱发复制大鼠AD模型;Morris水迷宫观察AD大鼠行为学变化;比色法测大鼠血清和脑匀浆SOD、MDA、GSH-PX活性;ELISA法测定脑匀浆中AchE、ChAT活性和MAO含量;ELISA法测定了大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量;HE染色法观察海马病理损伤;电镜观察各组大鼠海马组织超微结构的变化;采用基因芯片观察了有剂量依赖性变化的差异基因;并对部分基因进行了RT-PCR技术验证,采用Rat Alzheimer’s Disease PCR Array对基因芯片所筛选的信号通路进行了研究;采用了蛋白质质谱技术筛选检测了各组间有差异表达的蛋白质靶点。结果:黑逍遥散对Aβ25-35诱导AD 模型大鼠学习记忆能力具有改善作用;还可提高大鼠血清和脑组织中SOD与GSH-PX活性、降低MDA含量;可提高脑组织匀浆ChAT含量,降低AchE、MAO活性;可改善AD 模型大鼠脑组织病理损伤;基因芯片结果显示:与假手术组比较,模型组有583个基因上调表达,579个基因下调表达;与模型组比较,黑逍遥散各组干预AD大鼠模型后,71个基因的剂量依赖性上调,70个基因的剂量依赖性下调。RT-PCR技术对差异基因wisp1、crbbp、egr4、igfbp-1、casq2、Bcl-2、zfp483、zfp37和ZIC4进行了验证,结果显示RT-PCR与基因芯片结果一致。PCR Array结果显示:各剂量黑逍遥散干预后,6个基因Apbb1、map、AchE、casp3、clu、Apba1的表达出现了显著的变化。蛋白质谱芯片检测显示:与假手术组相比,模型组大鼠海马组织有50个蛋白上调,24个蛋白下调;与模型组相比,黑逍遥散高剂量组大鼠海马组织有46个蛋白上调,27个蛋白下调表达。结论:黑逍遥散对AD 模型大鼠学习记忆能力和脑组织病理损伤具有明显改善作用,其作用机制可能与抗自由基氧化、调节中枢胆碱能神经元和单胺类神经元活性有关。通过芯片筛选和验证了15个与AD相关的靶点,项目系统地研究了黑逍遥散的药理作用和靶点。

项目成果
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数据更新时间:2023-05-31

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