盆腔器官脱垂的比较蛋白质组学研究

盆腔器官脱垂（POP）是表现为盆腔器官和其相邻的阴道壁突入阴道或从阴道脱出的盆底支持缺陷性疾病。绝经后妇女发病率约50%，严重影响患者生活质量。POP病因复杂，目前的病因学研究内容纷杂多样，结果不甚一致，POP的临床治疗也疗效欠佳，因此迫切需要POP的病因学研究发掘新的研究靶点，全面解析其发生机制，并为该病的预防、治疗方案选择等提供帮助。蛋白质是生命功能的直接体现者，在后基因组时代对于疾病相关基因及其功能的研究主要集中在蛋白质组学研究上。迄今尚无有关POP患者蛋白质组学研究的报道。我们的前期研究提示POP患者盆底支持组织的形态结构和基因表达有差异。本研究通过双向电泳和质谱分析建立POP患者及正常对照组盆底组织的蛋白质表达谱，找出差异蛋白进行功能分析，并与我们前期的基因芯片结果结合，全面系统地解析POP发病的分子机制，使其病因学研究更具连续性、整体性，对于POP的有效诊治具有重要的指导意义。

背景：盆腔器官脱垂（POP）严重影响患者生活质量。目前的病因学研究内容纷杂多样，结果不甚一致，POP的临床治疗也疗效欠佳，迫切需要POP的病因学研究发掘新的研究靶点，为该病的防治提供帮助。蛋白质是生命功能的直接体现者，在后基因组时代对于疾病相关基因及其功能的研究主要集中在蛋白质组学研究上。迄今尚无有关POP患者蛋白质组学研究的报道。.目的：通过双向电泳和质谱分析建立POP患者及正常对照组盆底组织的蛋白质表达谱，找出差异蛋白进行功能分析。内容：.1．在绝经状态、年龄、产次等因素匹配的前提下，选取5例POP与5例无POP患者的子宫主骶韧带复合体标本，提取组织总蛋白，普通双向电泳分离，银染显色鉴定蛋白质抽提质量以及在胶图上的分布情况，并优化实验方法。.2．荧光染料分别标记POP组、对照组以及内标，进行双向电泳得到双向荧光差异凝胶图谱。同时制作制备胶。对胶图进行匹配和差异分析，筛选出两组之间|AV.Ratio|≥1.5，P＜0.05的差异表达蛋白质点。.3．将差异蛋白质点胶内酶解后进行MALDI-TOF质谱分析和数据库搜索，鉴定差异表达的蛋白质点。4．应用实时荧光定量PCR验证差异表达的蛋白。结果：.1．提取的组织蛋白经定量和普通双向电泳检测，蛋白质浓度符合实验要求，在胶图上分离情况满意，平均可获得1224±22个蛋白质点。.2．获得5张双向荧光差异凝胶电泳胶图，每张胶图上共约1111±54个蛋白质点，经过比较分析筛选出33个差异表达蛋白质点，均在POP组下调，最大下调比例为8.5倍。.3．质谱成功鉴定出12种差异蛋白, 采用实时荧光定量PCR法验证POP组与对照组之间的有意义的差异表达蛋白：电子传递黄素蛋白、平滑肌肌动蛋白、转胶蛋白、丝切蛋白-1、肌球蛋白碱性轻链、半乳凝素-1、亲和素A、载脂蛋白A-I。结果显示8种蛋白在POP组的相对表达量均明显低于对照组，佐证了蛋白组学结果的可信性。.结论：1．肌动蛋白、转胶蛋白、肌球蛋白和丝切蛋白的下调可导致细胞骨架异常以及收缩功能异常，使POP患者的盆底支持组织逐渐松弛形成脱垂。.2. 电子传递黄素蛋白的减少与线粒体异常相关，线粒体的异常可加重患者盆底组织的衰老程度，增加POP发生的风险。