核仁素对烧伤皮肤成纤维细胞转归的影响及其机制研究

烧伤创面变性真皮中成纤维细胞的转归及其机制研究仍是烧伤创面修复研究的热点。核仁素是一种具有多生物学功能RNA结合蛋白，但其在皮肤成纤维细胞热损伤转归中是否具有及具有何种作用，尚未见报道。申请者最近研究发现：核仁素可能是变性真皮转归过程中一个新的重要的内源性保护分子。本项目分别从mRNA和蛋白质水平探讨核仁素在皮肤热变性修复中的时空表达模式；采用基因转染和RNA干扰技术探讨核仁素在皮肤成纤维细胞热变性转归中的作用；采用蛋白质-RNA免疫共沉淀、基因芯片及生物信息学技术筛选出可能被核仁素调控的下游基因；采用Real time-PCR、蛋白质印迹研究核仁素对下游基因表达的影响；采用RNA凝胶滞留实验、紫外交联、mRNA稳定性分析及报道基因深入探讨核仁素对下游基因的调控机制。开展本项目有助于阐释核仁素在皮肤成纤维细胞热损伤转归中的作用及其机制，为深度烧伤创面的治疗提供新的思路和实验线索。

烧伤创面修复是一个复杂的动态过程，涉及多种细胞、细胞外基质、细胞因子等多因素参与。成纤维细胞、血管内皮细胞是主要的修复细胞，深入了解成纤维细胞、血管内皮细胞在创面修复过程中的作用对于进一步认识创面修复过程具有重要意义。核仁素是一种具有多生物学功能DNA、RNA结合蛋白，但其在变性真皮转归中具有何种作用，尚不清楚。本项目研究发现：（1）热变性成纤维细胞恢复过程中细胞增殖迁移增加，核仁素在变性真皮与热变性成纤维细胞中的表达增加，核仁素低表达时热变性成纤维细胞增殖、迁移的减低，核仁素高表达时热变性成纤维细胞增殖、迁移的增高，核仁素可能通过上调热变性成纤维细胞转归过程中TGF-β1的表达影响细胞的增殖、迁移从而促进创面修复；（2）热变性内皮细胞恢复过程中细胞增殖迁移增加，核仁素在热变性内皮细胞中的表达增加，进而核仁素影响热变性内皮细胞增殖与迁移，同时可以影响热变性内皮细胞的血管生成，核仁素可能通过上调热变性内皮细胞转归过程中VEGF的表达调控内皮细胞的增殖与迁移以及血管的生成影响创面促进创面修复。上述研究为烧伤创面修复以及保留变性真皮与整张自体薄中厚皮片移植技术，提供了理论依据。