DNA-PKcs调控细胞有丝分裂灾变死亡在卵巢癌顺铂耐药中的作用机制及靶向逆转

卵巢癌耐药一直是临床治疗的难题。本项目前期工作发现沉默 DNA-PKcs后卵巢癌细胞出现有丝分裂灾变死亡的特征，细胞对顺铂的敏感性增加，但其分子机制尚不清楚。本项目以DNA-PKcs 表达抑制的卵巢癌细胞粘附耐药模型为基础，观察细胞有丝分裂灾变死亡现象；构建靶向DNA-PKcs信号通路的RNAi文库，采用基因组学和新颖的siRNA bar code screens文库筛查技术、免疫共沉淀结合蛋白质组学分析、质谱分析和GST-pull down及生物信息学方法等技术，鉴定DNA-PKcs调控细胞有丝分裂灾变死亡的关键基因；并鉴定与关键基因作用的功能基序和构建功能域缺失突变体；将所确定的基因或DNA-PKcs功能域缺失突变体与选择复制性腺病毒载体共同构建成为靶向基因，进行体内验证。旨在阐明DNA-PKcs调控细胞有丝分裂灾变死亡在卵巢癌耐药中的作用机制，寻找新的下游靶点及发展新的逆转策略。

本项目采用基因组学研究的方法，以优化的DNA-PKcs 表达抑制的卵巢癌细胞粘附耐药模型为基础，观察细胞有丝分裂灾变死亡现象；并从此关键环节着手，利用现有的生物信息学技术筛选出DNA-PKcs下游基因，应用高效shRNA真核表达载体来构建DNA-PKcs RNAi文库。采用新颖的验证文库转录沉默效果的siRNA bar code screens技术、免疫共沉淀结合二维蛋白电泳、质谱分析和GST-pull down等技术筛选和鉴定DNA-PKcs调控卵巢癌细胞有丝分裂灾变死亡的关键基因PIG3；并鉴定DNA-PKcs与PIG3相互作用的功能基序（Motif），由此构建功能域缺失突变体；运用RNAi文库在粘附耐药模型中验证这些关键因子的功能，从而诱导细胞有丝分裂灾变死亡以逆转卵巢癌耐药；并将筛查到的关键靶基因或DNA-PKcs功能域缺失突变体引入选择复制性腺病毒载体，成功抑制裸鼠移植瘤动物模型中移植瘤的增殖，进行针对性分子阻断或逆向调节，从而达到高效、特异性遏制卵巢癌耐药的目的。