基于Urocortin-PKC/ERK信号通路电针干预大鼠缺血再灌注心肌的保护机制

This project attempts to carry out a preliminary discussion about the electroacupuncture intervention mechanism of cardioprotection induced by urocortin (UCN), a kind of cardioprotective factors. Research contents: 1. Observe the intervention effect of electroacupuncture on scathing myocardium by means of the differention of LDH and CK in blood, electrocardiogram and apoptosis of myocardial cells. 2. Discuss the self-protection of myocardium by means of determining the expression of Ucn and CRF-R2β in left ventricular myocardial tissue. 3. Explore if the protection effect of electroacupuncture comes true by the PKC/ERK signal transduction pathway through administration of CRF-R2β antagonist and agonist. Research significance: 1. This research focus on the self-protection of myocardium induced by electroacupuncture, and it is suitable for the little intermittent myocardial injury in clinic. 2. The mechanism of self-protection of myocardium induced by acupuncture may turn into a promising research direction. In consideration of the numerous signal transduction factors, the applicant will continue to expand the research field in order to find the neurobiology basis of acupuncture on protecting cardiac.

本项目从对损伤心肌保护的角度探讨电针对心肌保护因子Ucn诱导的心肌保护途径干预机制。研究内容：1.通过心电、血液中LDH、CK的变化以及心肌凋亡细胞的检测观察电针对心肌损伤的干预效应。2.左心室心肌组织Ucn、CRF-R2β的表达，探讨在电针干预下，Ucn介导的心肌自我保护机制的变化。3.分别介入CRF-R2β特异性拮抗剂、激动剂，检测左心室心肌组织PKC/ERK变化，探讨电针对心脏进行保护的途径是否通过干预Ucn介导的PKC/ERK信号转导系统来实现的。研究意义：1.本研究对电针诱发心脏的自我保护途径进行研究，研究结果微小间断性损伤时可较多用于临床进行预防。2.针灸干预心肌保护因子激发心肌自我保护机制研究以后可能是一个新的研究方向，涉及到本研究的信号转导因子较多、较复杂，申请人将会继续涉猎并拓展此研究的领域，阐述针灸保护心脏的神经生物学基础。

Ucn是一种心脏保护性多肽，与促肾上腺皮质激素释放因子-2β受体（CRF-R2β）结合后对心脏起到保护作用，经文献研究二者结合物可以通过PKC/ERK途径对损伤心肌起到保护作用，同时针灸刺激穴位也可以达到减少心肌损伤的作用，但是针灸是否通过干预Ucn达到保护心脏的作用目前尚不可知。本研究中通过介入CRF-R2β的拮抗剂和激动剂进行实验设计，分成空白对照组、假手术组、模型对照组、电针组、电针+拮抗剂组、激动剂组共6组进行研究，在研究中发现由于手术操作涉及到骨骼肌肌肉的损伤，故CK、CK-MB、AST指标在多组大鼠生化指标中均有变化，LDH由于造模时间较短基本无变化，而对心肌损伤较敏感的指标肌钙蛋白（TNNI3）检测中提示，电针对腧穴的干预有一定的心脏保护作用，而CRF-R2β拮抗剂astressin减弱电针对损伤心肌的干预效应。机制研究指标方面：在注入CRF激动剂后，激动剂组CRF的含量明显增高，并且电针组、电针+拮抗剂组与模型对照组比较虽然没有明显差异，但是均有表达增高的趋势，而且电针组较电针+拮抗剂组也有增高的趋势，因此显示电针可能存在增加CRF含量从而能提高与Ucn的结合量而达到对损伤心肌保护的作用。因此本研究认为针灸可以起到心肌保护的作用，以后的临床中会逐渐用于临床，结合针灸刺激可以提高Ucn的结合物，共同联合达到对心肌保护的作用，同时也是中西医结合的趋势。本课题组成员均认为本研究的成果具有更加宽广的应用前景。