生肌玉红膏载入修饰后胶原促血管新生及发生的实验研究

本课题在此德国国家基金(BMBF Project 0312692)基础上，通过鸡胚尿囊膜实验筛选出生肌玉红膏载入修饰后胶原的最佳剂量，并在此基础上开发出可以局部缓释生肌玉红膏主要有效成分的肝素修饰后的胶原，该胶原本身具有多靶点诱导血管内皮祖细胞分化与促微血管新生成的功效，其目的是通过改进传统生肌玉红膏的载体，去除原膏中轻粉通过促进血管再生来提高生肌疗效；并在蛋白及基因水平上阐明其作用靶点及机制。本研究成果可为通过将中药传统外用剂型与现代最新外用可降解功能敷料有机结合来提高疗效提供理论依据和线索，同时可开发出一种新颖的含中药有效成分的局部外用制剂，该制剂具有局部原位促进缺血性创面愈合，同时可以植入体内，是组织工程中器官再造的理想载体与支架。

课题申报书中的主要研究内容包括生肌玉红胶原的制作与评价，细胞实验评价其促血管新生的机制及通过动物试验制成后肢缺血模型，探察生肌玉红胶原对慢性溃疡的修复作用；通过血管荧光多普勒实时测定创面周围的血流状况。研究目标为研制开发出一种可控降解生肌玉红膏胶原，具有促进微血管及组织再生的功效，可以改善创面愈合。.对照申报书内容与目标，本课题研究结果如下：.1生肌玉红胶原最佳工艺条件的确定：用70%乙醇加热回流提取2次生肌玉红膏提取液0.5 ml无菌条件下载入胶原，-50度冻干，包装后钴60消毒，备用。.2 细胞增殖实验结果示50ug/ml~2.4mg/ml的生肌玉红膏提取液各个浓度的药物均可以促进细胞增殖，且以1.6mg/ml浓度组细胞增殖最强。生肌玉红膏提取液胶原结合具有协同作用。鸡胚尿囊膜实验结果示生肌玉红胶原促进血管新生的最佳量效关系为生肌玉红膏提取液浓度1.6mg/ml、0.5ml载入胶原。.3 与贝复剂、生理盐水比较，生肌玉红胶原海绵可显著促进成纤维细胞增殖，增加创面血红素氧化酶1、转化生子因子β1及增殖细胞核抗原的表达，提高创面愈合率，缩短创面愈合时间。.4 生肌玉红胶原植入后，大鼠行为正常，实验组标本周围皮下血管增多，呈轮辐状生长，病理切片示实验组胶原周围组织随着时间推移，炎性渗出减少，肉芽组织增生，到28d时已形成成熟的纤维结缔组织。生肌玉红胶原可显著促进新生血管长入埋植后的胶原并刺激胶原周围组织的微血管新生，VEGF、ANG-1因子实验组表达增加，VEGF在术后第3d即达到峰值，而ANG-1在术后第7d达到峰值。促进创面愈合同时可以减少瘢痕形成，机制与调节创面bFGF水平与创面I、Ⅲ型胶原比例。生肌玉红胶原植入后组织相容性更佳，发挥出生肌玉红膏及胶原各自促创面愈合的优势。.5大鼠后肢缺血实验显示生肌玉红胶原通过诱导了H IF-1α-mRNA、VEGF-mRNA等血管新生相关基因的高表达而改善缺血组织血流灌注、促进微血管新生而达到促进修复的功效。. 发表核心期刊论文7篇，其中已发表4篇，3篇已录用，发表国际期刊论文1篇。参加国际会议2次，做大会发言。申请专利1项，处于专利实质审查阶段。培养硕士研究生8名。其中5名已毕业，1名博士研究生在读。科研经费均按申请范围支出。