CREB-miR-212/132-TORC1-CREB信号通路反馈性调控网络在骨癌痛维持中的作用

我们的研究结果发现脊髓背角NMDA受体在包括骨癌痛在内的多种疼痛中起重要作用。NMDA受体激活后的下游信号分子CREB蛋白可以引起多种基因表达从而使其信号持续发挥作用，在疼痛过程中起重要作用。我们的预实验也发现骨癌痛时小鼠脊髓背角磷酸化的CREB蛋白表达显著增加。TORC1蛋白是CREB的共激活分子。最近有研究发现miR212、miR132可以放大TORC1-CREB信号通路的功能。本研究在谷氨酸诱导离体脊髓背角神经元CREB信号通路模型和小鼠骨癌痛模型上，使用RNAi技术抑制CREB、TORC1基因表达，用钙调磷酸酶抑制剂ISA247下调TORC1活性以及反义锁核苷酸抑制miR-212和miR-132表达，通过行为学、分子生物学等技术，探讨CREB-miR-212/132-TORC1-CREB信号通路在骨癌痛维持中的作用,为临床控制骨癌痛提供新的思路。

骨癌痛是最常见的难治性癌痛之一，对其发病机制及防治的研究至今仍未取得突破。本研究在小鼠骨癌痛模型上，使用CREB基因RNA干扰腺病毒载体、miR-212/132的反义锁核酸、TORC1（CREB转录共激活因子1，CRTC1）基因RNA干扰腺病毒载体的方法，观察骨癌痛小鼠痛行为学和脊髓水平CREB、CRTC1、miR-212/132表达变化规律，探讨CREB-miR-212/132-TORC1-CREB信号通路在脊髓水平骨癌痛形成和发展中的作用，为临床控制癌痛提供新的思路和方法。我们的研究结果显示(1)在骨癌痛形成过程中，脊髓水平CRTC1 、p-CREB、miR-212/132、BDNF在接种肿瘤细胞7d后表达量明显增加。提示CRTC1、p-CREB、miR-212/132及BDNF在骨癌痛中起关键作用。(2)鞘内注射CRTC1基因RNA干扰腺病毒可以改善小鼠骨癌痛，同时降低脊髓水平p-CREB、NR2B、BDNF、miR-212/132的表达，并能降低骨癌痛引起的脊髓背角星形胶质细胞的增殖与活化。(3)从骨癌痛造模后第14天开始，重复鞘内注射CREB基因RNA干扰腺病毒载体，骨癌痛组小鼠痛行为学明显改善，CRTC1、NR2B、BDNF、miR-212/132的表达均有不同程度下调，免疫荧光结果显示，鞘内注射CREB基因RNA干扰腺病毒可以抑制骨癌痛引起的脊髓背角星形胶质细胞的增殖与活化，表现为GFAP阳性细胞数量减少与荧光强度降低。(4)鞘内注射miR-132反义锁核酸可缓解骨癌痛小鼠痛行为学，并抑制脊髓水平BDNF和GFAP的上调，提示脊髓水平miR-132/BDNF/星形胶质细胞信号通路在小鼠骨癌痛维持中的作用。(5)重复鞘内注射miR-212反义锁核酸通过抑制脊髓水平p-CREB的表达缓解骨癌痛小鼠痛行为学。提示miR-212/p-CREB信号通路在小鼠骨癌痛维持中的作用。(6)在细胞水平，谷氨酸处理神经元可表现p-CREB表达增加，CRTC1基因RNA干扰腺病毒仅可降低CRTC1表达水平；而CREB基因RNA干扰腺病毒可降低CREB及CRTC1 mRNA表达，但不影响NR2B的磷酸化。该课题揭示脊髓水平CREB-miR212/132-CRTC1-CREB信号转运通路在骨癌痛形成和发展中的作用，为临床防治癌痛提供理论依据。