桂枝甘草汤抗心律失常电生理机制研究

心律失常危害大、单一靶点的化药疗效差、副作用明显，而心肌细胞离子通道电流的动态平衡失调是心律失常发生的关键，研究能够多靶点干预、恢复离子通道正常生理功能的药物是今后药物研发的方向。桂枝甘草汤是仲景益气温阳法治疗心悸的基础方，前期临床和实验研究提示该方具有很好的抗心律失常作用，但抗心律失常的电生理作用机制不清楚。因此本课题拟采用能反映中药物质群的指纹图谱法，严格质控和明确桂枝与炙甘草组方配伍前后及含药血清的中药物质群成分及变化，并采用膜片钳等技术，观察单个心肌细胞动作电位、钾、钠、钙离子通道电流的变化、研究桂枝甘草汤抗心律失常的电生理机制。以期从细胞水平为桂枝甘草汤临床治疗心律失常提供实验依据，并为下一步研究筛选桂枝甘草汤的有效组分、或单体奠定基础。

目的: 明确桂枝与炙甘草组方配伍前后、及含药血清的中药物质群成分及变化，观察含药血清对豚鼠及大鼠心室肌细胞膜电位及各种通道电流的影响。.方法：利用HPLC对桂枝甘草汤水提液成分类别进行研究，用LC-MS明确桂枝水提液、炙甘草水提液、桂枝甘草汤水提液中主要药物组分及变化。急性酶解分离豚鼠和大鼠心脏，记录各组药物膜电位及通道电流的变化。.结果：1.指认25个共有峰其中4个分别为甘草酸、甘草苷、桂皮酸和桂皮醛，四物质及浸出物提取量分别为：5.93，11.73，12.25，12.34，172.86mg/g。.2．对动作电位的影响：桂枝组显著减小Vmax；炙甘草组显著延长APD50；炙甘草组显著延长APD90；桂枝组显著延长APD50-90；炙甘草组显著延长APD；桂枝组显著减小V3；对APA和RP没有影响。对大鼠Vmax和APA无影响，甘草加桂枝组使RP减小，桂枝甘草汤组延长APD50最显著，桂枝组延长APD90和APD显著，甘草组减小V3显著。.3．均不同程度地抑制ICa-L，桂枝组使ICa-L激活曲线左移，甘草加桂枝组和桂枝甘草汤组使ICa-L激活曲线右移；各组分使ICa-L稳态失活曲线左移；使得ICa-L稳态失活后恢复减慢。.4．均不同程度地抑制INa，桂枝甘草汤组延长激活时间常数，桂枝组和甘草加桂枝组使INa稳态激活曲线右移，使INa稳态失活曲线左移；不影响恢复曲线。.5．均不同程度地抑制Ito电流。.6．甘草组和桂枝甘草汤组对IK1抑制显著。.7．甘草组显著抑制IKs稳态峰值电流，对IKs-tail的时间依赖性恢复曲线没有影响。.8．桂枝甘草汤组抑制IKr电流显著，各组使IKr-tail稳态激活曲线左移。.结论:1.多指标综合加权法能较为合理地反映桂枝甘草汤的整体药效，HPLC方法灵敏度高、稳定性和准确性良好。.2．桂枝甘草汤具有Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ类多种抗心律失常药物的综合作用。