弗氏枸橼酸杆菌鞭毛蛋白（FliC）的功能研究

Flagella，as a vital moving organ of bacterium, is also an important virulent factor involved in the pathogenic process. FliC, as a flagellar filament structural protein, was involved in some pathogenesis of infection. In C. freundii, it has not been known to FliC function in the pathogenic process. In order to explore the function of FliC in C. freundii, we are applying for this project. In this project, a virulent isolate of C. freundii (CF74)as study object, a fliC deletion mutant and its complementary strain (fliC +) were constructed through double crossover allelic exchange by means of the suicide vector pWM91. It has been tested to virulence-associated phenotypes and pathogenicity in these strains，including flagellum formation, motility, growth, biofilm formation, adhesion, cytotoxicity, and cytokine. And we are trying to find a protein pathway in FliC promoting inflammation. In order to find new virulence factors in C. freundii.

鞭毛作为细菌运动的重要器官，也是重要的毒力决定因子，参与了一系列的致病过程。鞭毛蛋白（FliC），作为鞭丝的结构蛋白，参与一些病原菌感染的过程。但是在弗氏枸橼酸杆菌中，鞭毛蛋白在致病过程中的具体作用和功能尚未见报道。为了探索鞭毛蛋白在弗氏枸橼酸杆菌中的作用，本课题拟以测序的弗氏枸橼酸杆菌强毒株CF74作为实验菌株，通过自杀性质粒pWM91，构建fliC的精确缺失突变株(ΔfliC)及其互补菌株(fliC+)，研究这3株菌与毒力相关的表型和致病性，包括：鞭毛形成、运动性、生长情况、生物膜形成、粘附性、细胞毒性和刺激细胞因子产生,同时我们试图去寻找FliC促炎症作用的蛋白通路,为寻找弗氏枸橼酸杆菌新的致病因子提供实验依据。

鞭毛作为细菌运动的重要器官，也是重要的毒力决定因子，参与了一系列的致病过程。鞭毛蛋白（FliC），作为鞭丝的结构蛋白，参与一些病原菌感染的过程。但是在弗氏枸橼酸杆菌中，鞭毛蛋白在致病过程中的具体作用和功能尚未见报道。为了探索鞭毛蛋白在弗氏枸橼酸杆菌中的作用，本课题用一株测序的弗氏枸橼酸杆菌强毒株CF74作为实验菌株，通过自杀性质粒pWM91，构建fliC基因的精确缺失突变株(ΔfliC)和回补菌株(pfliC)。结果发现：FliC蛋白影响弗氏枸橼酸杆菌CF74的游动性和生物膜形成能力；通过透射电子显微镜下观察发现，缺失突变株(ΔfliC)没有鞭毛长出；FliC参与弗氏枸橼酸杆菌CF74对宿主细胞的粘附和细胞毒作用。CF74特有的T6SS系统对其鞭毛蛋白FliC，在转录水平和蛋白水平均有正调控作用，从而影响细菌的swimming运动；并且影响FliC的分泌。T6SS和FliC蛋白均参与引起IL-1β降低的炎性体免疫通路，而且CF74野生株参与Caspase-1或Caspase-11的促炎通路。目前已发表标注本项目的论文共计4篇，其中SCI收录1篇。