WNK4基因负调控因子的功能鉴定和作用机制的研究

WNK4是近年发现的肾脏离子转运途径中的关键调控蛋白，对机体血压调节具有重要作用，已成为研究热点。当前对其研究主要集中于功能研究，而对其转录调控机制尚不十分清楚。申请者前期研究发现WNK4基因的一个重要负调控元件（Negative Regulatory Element,NRE），并通过实验确认有不明转录因子结合于NRE。在此基础上，本项目拟采用酵母单杂交系统从人肾脏cDNA文库中筛选能与NRE结合的转录因子，并通过EMSA和ChIP实验验证其对NRE的结合活性和特异性，进一步构建其真核表达载体转染HEK293细胞，通过real-time PCR、Western Blot以及荧光素酶活性分析鉴定其对WNK4基因转录表达调控的作用和机制。该研究结果将增加人们对WNK4基因转录调控分子机制的认识。