肺积方对裸鼠荷瘤模型血管正常化及微环境影响的实验研究

在既往临床实践研究证实中药肺积方与化疗联合应用有增效作用，并发现该方可降低肿瘤患者血管内皮生长因子（VEGF）血清浓度的基础上，围绕"抗血管新生可促使肿瘤内血管正常化并进一步促使微环境正常化进而提高抗肿瘤化疗疗效"这一新近认识的重要病理机制，从肿瘤血管结构、功能两个角度，采用活体观察荷瘤裸鼠背部视窗模型中肿瘤血管形态、长度、管径，免疫荧光染色法观察血管壁IV型胶原覆盖情况及覆盖率以及血管周围aSMA（血管平滑肌抗体）细胞数量，Wick－in－needle技术测量细胞间质压（IFP），微管技术测定微血管压力（MVP），同时观察大分子物质的在血管内外的"渗漏"情况，探讨在肺积方干预后实体瘤内部血管及微环境正常化的过程,进一步明确临床有效方剂肺积方的作用机理，为中医药抗肿瘤的作用机制研究开辟一个全新的视角，并为进一步组合更加有效的中西医联合临床治疗综合方案提供参考。

目的：探讨肺积方抑制裸鼠移植瘤组织血管生成及促进肿瘤血管正常化的作用及其机制。方法：1、首先建立人肺癌细胞株SPAC-1BALB/c裸鼠鼠背视窗模型。采用共聚焦显微镜活体观察鼠背视窗肿瘤内部血管，计算瘤内单位面积的平均血管数量和直径；同时用免疫荧光染色法观察肿瘤血管壁IV型胶原覆盖率以及血管周围aSMA（血管平滑肌抗体）细胞覆盖率。免疫荧光法观察TRIBC-BSA在血管外的“渗漏”程度。RT-PCR和免疫组化法检测肿瘤组织中CXCLl2、CXCR4、VEGF、MMP9 mRNA和蛋白表达及MVD水平。结果：1、血管数和血管直径：肺积方高、中剂量组血管数于第9、14天低于对照组（P<0.05）。2、肿瘤血管CollegenIV覆盖率与a-SMA阳性细胞覆盖率：高剂量组肿瘤血管CollegenIV覆盖率较对照组升高（P < 0.05）。中、高剂量组肿瘤血管a-SMA阳性细胞覆盖率较对照组升高（p<0.01）。自药物干预第6天，肿瘤血管aSMA和Collegen-IV覆盖率较对照组升高（P < 0.05）。3、TRITC－BSA渗出测定：肺积方高、中剂量组BSA渗透长度较对照组增加（P< 0.01；P< 0.05）。4、CXCLl、CXCR4、VEGF、MMP9 mRNA表达：肺积方高、中、低剂量组CXCL12 mRNA表达无差异（P>0.05）。与对照组相比，肺积方高、中剂量组CXCR4表达明显降低（P<0.01；P<0.05）。高剂量组MMP9表达较对照组降低（P<0.05）；高、中、低剂量组VEGF表达较对照组明显降低（P<0.01；P<0.05）。5、肿瘤组织中CXCLl2、CXCR4、VEGF、MMP9蛋白表达及MVD水平：肺积方高、中、低剂量组CXCL12蛋白表达与对照组无统计学差异（P>0.05）。高剂量组CXCR4 及MMP9蛋白表达较对照组明显降低（P<0.01）。高、中、低剂量组VEGF表达均较对照组明显降低（P<0.01）。MVD：与对照组相比，肺积方中、高剂量组MVD水平明显降低（P<0.01）。结论：肺积方具有抑制肿瘤血管生成并可能促进肿瘤血管正常化的作用。这种作用可能与肺积方增加血管aSMA和Collegen-IV覆盖率，促进大分子物质渗透，及下调肿瘤组织中CXCR4 、MMP9、VEGFmRNA和蛋白的表达及降低MVD水平相关。