行血益气温阳法调控Akt/GSK-3β/Snail轴抑制上皮间质转化抗卵巢癌转移的机制研究

Ovarian cancer is the third morbidity and most lethal gynecologic malignancy. Tumor invasion and metastasis is one of the more than 90% of the direct cause of death in patients with solid tumors. Looking for safe and effective pharmacological inhibition of tumor metastasis is the top priority. Our oncology department h has main therapy of promoting blood circulation tonifying qi and warming yang on ovarian cancer, which key formular is Compound Fuling Granule. Our research team found that, cooperate with chemotherapeutic drugs, Compound Fuling Granule could inhibit ovarian cancer metastasis. In recent years, studies have shown that, Akt/GSK-3β/Snail has exerted the key important effects in epithelial-mesenchymal transition to resist metastasis. This subject wants to observe the multi-level expression difference in transfer behavior,EMT phenotype, correlation protein, transcription factor,microRNA and so on, after using GSK-3β knockdown, GSK-3β overexpress,Akt inhibition and intervening with Compound Fuling Granule.We want to clarify the regulating mechanism on therapy of promoting blood circulation tonifying qi and warming yang on ovarian cancer to resist metastasis through Akt/GSK-3β/Snail axis.

卵巢癌发病率位居女性生殖系统恶性肿瘤第三位，但死亡率最高。肿瘤的侵袭转移是目前超过90%实体瘤患者死亡的直接原因，寻找安全有效的药物抑制肿瘤的转移是当务之急。本院肿瘤科针对卵巢癌的主要治法是行血益气温阳法，而行血益气温阳治法的核心组方是复方附苓颗粒。本课题组临床研究发现，复方附苓颗粒协同化疗药能有效抑制卵巢癌转移。近年研究表明，Akt/GSK-3β/Snail轴在抑制卵巢癌转移的关键步骤--上皮间质转化（EMT）中发挥重要作用。本课题拟通过GSK-3β敲低、GSK-3β过表达或使用Akt抑制剂后，观察复方附苓颗粒干预前后，卵巢癌细胞转移的生物学行为表现以及EMT表型、相关蛋白、转录因子、miRNA等多层次多靶点的表达情况，以期阐明以复方附苓颗粒为核心的行血益气温阳法通过调控Akt/GSK-3β/Snail轴来抑制EMT抗卵巢癌转移的分子机制。

卵巢癌发病率位居女性生殖系统恶性肿瘤第三位，但死亡率最高。肿瘤的侵袭 转移是目前超过90%实体瘤患者死亡的直接原因，寻找安全有效的药物抑制肿瘤的转移是当务之急。本院肿瘤科针对卵巢癌的主要治法是行血益气温阳法，而行血益气温阳治法的核心组方是复方附苓颗粒。本课题组临床研究发现，复方附苓颗粒协同化疗药能有效抑制卵巢癌转移。近年研究表明，Akt/GSK-3β/Snail 轴在抑制卵巢癌转移的关键步骤——上皮间质转化（EMT）中发挥重要作用。本课题通过复方附苓颗粒干预前后，卵巢癌细胞转移的生物学行为表现以及 EMT 表型、相关蛋白、转录因子、miRNA 等多层次多靶点的表达情况，以期阐明以复方附苓颗粒为核心的行血益气温阳法通过调控Akt/GSK-3β/Snail 轴来抑制EMT 抗卵巢癌转移的分子机制方法。我们发现（1）复方附苓颗粒能减轻卵巢癌细胞的耐药；（2）复方附苓颗粒能逆转TGF-beta诱导的卵巢癌细胞的上皮间质转化状态；（3）基因层面，复方附苓颗粒干预后的卵巢癌细胞基因变化与抑制增殖、抑制上皮间质化有关；（4）功能表型上，复方附苓颗粒能够对体外的卵巢癌细胞有抑增殖、抑克隆、促凋亡、促衰老、抑迁移、抑侵袭和抑转移等功能；（5）蛋白表达层面，复方附苓颗粒调控多个细胞周期蛋白的表达、抑制EMT相关Marker的蛋白表达，并抑制AKT/ GSK3β/Snail轴上相关蛋白；（6）miRNA层面，复方附苓颗粒能够降低EMT调控相关的miR34b/c和miR200a/c的表达；（7）在皮内注射模型鼠和尾静脉注射肺转移模型鼠中，复方附苓颗粒组与造模组相比，能明显抑制肿瘤的增殖和转移，促进肿瘤凋亡，减轻EMT关键蛋白和miRNA的表达，可能与pAKT/GSK3ß通路有关。总之，AKT/GSK3β轴不仅与抑制EMT有关，亦是逆转耐药、抑增殖、促凋亡等生物学功能的调控核心。故而复方附苓颗粒对卵巢癌细胞的体内及体外的多靶点效应可能是通过调控AKT/GSK3β轴来实现的。本项目丰富了行血益气温阳治法干预卵巢癌转移的多靶点分子机制，以期为进一步临床应用推广奠定理论基础，彰显中医药在肿瘤治疗领域中的重要价值。