基于免疫调控的肝俞直接灸防治原发性肝癌的肿瘤相关因子分子机制研究

"The fire has the force to pull up the mountain", Mr Cheng attaches importance to the method of direct moxibustion. Xie Xiliang, Mr Cheng' disciple, spent over 60 years studing the method of direct moxibustion and demonstrate its ability to enhance the body immune system, which has precise effect in preventing and curing hepatocellular cacinoma. So Xie made the study known to the public. Based on the findings, we put forward a hypothesis that "direct moxibustion has the ability to destroy the solid and resolve passive congestion", and study the mechanism of treatment of HCC rat models with direct moxibustion. We took direct moxibustion to stimulate the Ganshu(BL18) of rats at different time, then study the dose-effect relationship and rules of cancer cells growth after treatment and changes of liver function, morphology, CD4+ , CD8+, CD4+/CD8+, NK, LAK, TNF, TSGF and LIVIN in rats were studied by different methods such as biochemistry, Immunohistochemistry and molecular biology. The relationship between cancer cells growth and tumor-associated immunoregulation factors was especially studied so as to explore the time-effect relationship, dose-effect relationship and Molecular Mechanisms and finally verify our hypothesis.

"火有拔山之力"，承淡安先生极重直接灸法，其弟子谢锡亮经60多年研究，发现直接灸法能够有效的改善机体免疫功能，对于防治原发性肝癌有确切疗效，并公开其临床成果。基于此，笔者提出"直接灸法破坚化癥"的假说，拟研究直接灸法对防治原发性肝癌（HCC）大鼠模型的作用机制。采用直接灸法刺激模型大鼠肝俞穴，利用生物化学、免疫组化及分子生物学先进技术，研究直接灸法在不同时机干预模型大鼠后影响癌细胞生长的肿瘤免疫细胞及相关因子的量效关系与分子机制。主要观察模型大鼠肝功能、肿瘤形态学变化，重点探究T淋巴细胞（CD4+ 、CD8+、 CD4+ /CD8+）、自然杀伤细胞（NK）、激活杀伤细胞（LAK）以及肿瘤坏死因子（TNF）、肿瘤相关生长因子(TSGF)、凋亡抑制因子（LIVIN）的效应机制，进一步揭示癌细胞生长与肿瘤免疫细胞及相关因子的关系，并据此深入探究其时效关系、量效关系与分子机制，以期证实科学假说。

该课题基于谢锡亮临床防治肝癌的研究，并且发现直接灸能够有效改善机体免疫功能，基于此，笔者提出“直接灸法破坚化癥”的假说，拟研究直接灸法对防治原发性肝癌（HCC）大鼠模型的作用机制。采用直接灸法刺激模型大鼠肝俞穴，利用生物化学、免疫组化及分子生物学先进技术，研究直接灸法在不同时机干预模型大鼠后影响癌细胞生长的肿瘤免疫细胞及相关因子的量效关系与分子机制。.第一阶段预实验发现直接灸不同疗程对HCC模型大鼠的肝功能、肝脏形态学、肿瘤标记物甲胎蛋白及肿瘤相关因子具有良性调控作用。疗程1组的ALT、AST、AFP明显低于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；疗程2组ALT、AST、GGT、AFP含量与模型组比较有降低趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。肝脏组织切片HE染色光镜下观察，模型组肿瘤灶诱导形成；疗程1组胞浆均匀，癌细胞数量少，仅见少量结节形成；疗程2组肝脏保持正常组织形态，细胞染色均匀，癌细胞数量少，无结节形成或仅见少量结节。疗程2组TSGF、TNF-α含量低于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；第二阶段的正式实验还发现，不同的灸量和HCC模型大鼠的肝功能、肝脏形态学、肿瘤标记物甲胎蛋白及肿瘤相关因子之间有量效关系。实验将HCC模型大鼠分为5组，从造模开始就直接干预。造模结束后，直接灸1组、隔姜灸组AFP含量均明显低于模型组，差异具有统计学意义(P＜0.05）；直接灸1组、隔姜灸组TNF-α、TSGF含量明显低于模型组，差异具有统计学意义(P＜0.05）；与模型组比较，直接灸1、2组的CD3+T细胞含量明显升高（P<0.05，P<0.01），与隔姜灸组比较无统计学差异（P>0.05）；直接灸1、2组和隔姜灸组CD4+T、IL-2含量显著升高（p<0.05）；直接灸1、2组和隔姜灸组NK、CD8+T含量显著降低（p<0.05）。因此，直接灸法能够有效的调节HCC，并且不同灸量对调控HCC存在一定的量效关系。