炎症因子TNF-α诱导生成的内皮细胞微粒激活内皮细胞机制的蛋白质水平研究

Endothelial microparticle (EMP) derived from activated or apoptotic vascular endothelial cell(VEC) could be the biomarker for endothelial dysfunction. We have found that the level of EMP is related with sepsis and have made the activated endothelial cell model in vitro for proteomic research.EMP could also be the vector for exchanging intercellular information to alter downstream target cell function. We have found several differential proteins between unstimulated VEC and TNF-α-stimulated VEC. So we suppose that the differential proteins in EMP play important roles in the functions of EMP. We plan to study TNF-α-stimulated VEC and its EMP through the method of proteomics so as to analyze: (1)the differential proteins between unstimulated and TNF-α-stimulated VEC in EMP which change greatly in quantity and are associated with inflammatory and coagulation responses and cell apoptosis; (2)the functions of EMP affecting VEC in inflammatory and coagulation responses and cell apoptosis; (3)the proteins of (1) play a crucial role in the functions of EMP. The conclusion of this study will promote the further research of the mechanism of functions of EMP in sepsis.

血管内皮细胞（VEC）在活化或凋亡时产生的内皮细胞微粒（EMP）是反映内皮功能的标志物，我们发现其与脓毒血症严重程度呈正相关，并制作了适合蛋白质组学研究的离体活化VEC模型。同时EMP作为细胞间信息传递介质对靶细胞起着多种作用。我们初步发现了TNF-α刺激前后VEC差异蛋白，由此设想EMP所含的差异蛋白对EMP作用机制起了关键作用。本课题拟对经TNF-α诱导的VEC及其产生的EMP进行研究，通过蛋白质组学等技术进一步分析：（1）EMP所包含的TNF-α刺激前后HUVEC差异蛋白中表达量变化显著且与炎症反应、凝血反应、细胞凋亡密切相关的蛋白质；（2）EMP在炎症反应、凝血反应、细胞凋亡等方面对VEC所起的作用；（3）（1）中蛋白质在EMP对VEC作用过程中所起的关键作用。本课题结论将为深入研究脓毒血症时EMP作用机制提供基础。

血管内皮细胞（VEC）在活化或凋亡时产生的内皮微粒（EMP）不仅是反映脓毒症时内皮功能的标志物，而且是细胞间信息传递的介质。EMP在炎症反应、凝血反应、血管舒缩及内皮屏障功能多方面发挥作用，但是具体机制尚不清楚。本研究运用蛋白质组学技术对TNF-α诱导生成的EMP激活VEC的机制进行研究，在蛋白质水平上对EMP的作用机制进行探讨。目的：研究TNF-α诱导生成的EMP激活VEC的作用，发现在EMP促炎反应中起重要作用的蛋白质。材料和方法：本研究以EMP活化的人肺微血管内皮细胞为体外模型，以蛋白质组学技术为手段进行研究。结果：EMP能激活静息状态VEC，刺激其分泌炎症因子从而促进炎症反应，在这些炎症因子中IP-10起着重要作用，而EMP激活VEC的机制与NF-κB信号转导通路相关。运用蛋白质组学技术得到EMP刺激前后内皮细胞差异蛋白，将其和EMP总蛋白比较得到共同蛋白，对其进行定量分析和生物信息学鉴定，筛选出与EMP作用密切相关的蛋白质，对其中一种重要蛋白endocan进行检测，发现其在EMP促炎作用中的重要地位。结论：TNF-α诱导生成的EMP能激活VEC，促进炎症反应，多种蛋白质在EMP促炎作用中起重要作用。本研究结果可为发现脓毒症的诊断标志物和治疗靶点提供理论基础。