半胱氨酰白三烯受体2对脑缺血损伤后小胶质细胞激活的调节作用及机制

脑缺血后小胶质细胞激活可诱导炎症变化，研究其激活的调节机制有重要意义。我们最近发现半胱氨酰白三烯受体2（CysLT2受体）与小胶质细胞激活有密切关联，本项目拟深入研究：（1）脑缺血后CysLT2受体调节小胶质细胞早期激活的作用，在整体及细胞水平比较缺血损伤后CysLT2和CysLT1受体表达特点；用shRNA抑制CysLT2受体表达以及用CysLT受体激动剂、拮抗剂后，观察小胶质细胞增殖、吞噬、炎症因子释放等变化。（2）阐明CysLT2受体调节小胶质细胞激活的上、下游信号通路以及与CysLT1受体间的相互调控，如IFN-r等对CysLT2受体表达及小胶质细胞激活效应的协同效应；细胞内Ca2+信号以及ERK1/2-EGR-1-IL-8通路变化；CysLT2受体与CysLT1受体二聚体的存在，增强或抑制一种受体亚型表达对另一亚型的表达及效应的影响。本项目将为脑缺血药物治疗提供新线索。

本项目完成预定计划，阐明了CysLT2受体介导脑缺血后小胶质细胞激活及神经损伤的特点以及细胞机制。取得以下主要成果：（1）整体水平上首次阐明CysLT2受体参与调节脑缺血后小胶质细胞激活。大鼠局灶性脑缺血后，CysLT2受体表达与时空分布与神经元损伤及小胶质细胞激活密切相关，在急性期（24 h）主要表达在缺血中心区的神经元；后期（14 d）表达在缺血中心区激活、增生的小胶质细胞。并且，首次证明新的CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI 3379抗大鼠局灶性脑缺血的作用，以及对小胶质细胞激活的调节作用。（2）在细胞实验中阐明CysLT2受体调节缺血性损伤诱导大鼠原代小胶质细胞激活，进而间接损伤神经元。经系列实验首次证实CysLT2以及CysLT1受体调节小胶质细胞激活的作用。在大鼠皮层细胞混合培养、神经元和小胶质细胞单独培养及共培养，证明CysLT2受体是调节缺血性损伤诱导大鼠小胶质细胞激活的主要因素，通过激活小胶质细胞吞噬、细胞因子释放，进而间接损伤神经元；CysLT1受体仅起调节细胞因子释放的辅助作用。但是，在小鼠BV2小胶质细胞中，却发现CysLT1受体是主要调节因素。这些新发现为理解CysLT受体介导的中枢调节效应，提供了实验证据。（3）阐明CysLT2受体相关的信号转导特点。在CysLT1和CysLT2受体转基因HEK293细胞株，激动剂LTD4通过CysLT2受体激活ERK1/2，进而激活转录因子EGR-1，从而增加炎性细胞因子IL-8合成和释放，而CysLT1受体不参与调节该通路。（4）其他新发现：①CysLT1受体介导细胞因子TGF-1调节星形胶质细胞迁移，但不改变其增殖，表明CysLT1受体通过与细胞因子之间相互作用而调节星形胶质细胞功能。②CysLT1受体通过核移位而介导内皮细胞缺血性损伤。③新型P2Y受体PR17在大鼠局灶性脑缺血后表达增加，并参与调节急性期神经损伤以及后期小胶质细胞激活。④在水通道蛋白AQP4基因敲除小鼠，发现脑冰冻伤急性损伤减轻，而迟发型损伤及小胶质细胞炎症加重；还可加重慢性脑缺血损伤，加重小胶质细胞炎症，增加CysLT1、CysLT2受体表达。综上所述，本项目发表SCI论文10篇，国内论文7篇，在小胶质细胞功能调节以及中枢CysLT受体效应方面，取得特色鲜明的研究成果。