新型半胱氨酰白三烯/尿嘧啶核苷酸受体GPR17通过调节小胶质细胞激活影响脑缺血损伤的机制

GPR17是受半胱氨酰白三烯CysLTs及尿嘧啶核苷酸UDP双重调节的G蛋白偶联受体。我们发现大鼠脑缺血后GPR17诱导表达在小胶质细胞，但其对小胶质细胞功能的调节及对脑缺血损伤影响的机制不清。本项目拟以GPR17基因干扰为主要手段，观察脑内GPR17对大鼠脑缺血后小胶质细胞激活及脑缺血损伤的影响；小胶质细胞GPR17对缺糖缺氧引起共培养神经元损伤的影响；在原代及传代小胶质细胞，观察CysLTs和/或UDP对GPR17激活及对小胶质细胞激活的影响；以 GPR17单独或与CysLT1受体或CysLT2受体共转染HEK293细胞，经CysLTs和/或UDP处理后，观察CysLTs和UDP的协同作用、GPR17对CysLT1或CysLT2受体的调节作用。旨在阐明GPR17对脑缺血后小胶质细胞激活的调节及机制、该调节对脑缺血损伤的影响，探讨GPR17作为调节小胶质细胞激活、脑缺血损伤靶点的可能性。

GPR17是受半胱氨酰白三烯CysLTs及尿嘧啶核苷酸UDP双重调节的G蛋白偶联受体。有报道表明GPR17是脑缺血损伤的一个损伤感受器。脑缺血后的神经功能损伤，可由缺血直接引起也可由缺血后炎症所致的继发损伤引起。因而，我们分别在整体模型和离体细胞模型上探讨了GPR17在缺血后炎症中的作用，发现：1）GPR17在大鼠局灶性脑缺血（MCAO模型）中介导了局灶性脑缺血急性期神经元损伤及后期的小胶质细胞增生激活。2）小鼠小胶质细胞株BV2小胶质细胞以缺糖缺氧/恢复（OGD/R）模拟脑缺血处理，可诱导GPR17的表达上调，抑制GPR17表达或阻断其与配体结合，可减轻OGD诱导的BV2细胞炎症反应。3）在OGD联合LTD4或NMLTC4刺激时，原代神经细胞混合培养的小胶质细胞是CysLT2受体介导的缺血性神经元损伤的靶细胞；而CysLT1受体主要介导BV2小胶质细胞的激活；我们也发现在OGD/R处理后，GPR17与CysLT1受体在表达与分布改变一致；GPR17敲低，细胞表达CysLT1受体上调；这表明GPR17、CysLT1受体、CysLT2受体间存在一定的相互调节作用；4）因而，我们建立了一种的新的检测技术：基于切割绿荧光蛋白（Split GFP）的G蛋白偶联受体（GPCR）标记方法，实现了活细胞GPCR的灵活和快速标记，用以分析GPR17、CysLT1受体、CysLT2受体间的相互作用。本项目目前发表SCI收录论文11篇，修回1篇，另有1篇在整理中。通过本项目研究，我们初步明确了抑制小胶质细胞GPR17过表达或阻断GPR17与其配体结合具有一定抗脑缺血后炎症的作用且机制涉及细胞上GPR17、CysLT1受体、CysLT2受体间的相互调节作用；同时我们也开启了新的研究方向，即GPR17在脑缺血后炎症中的作用以及G蛋白偶联受体的新标记方法。