MC2R基因启动子区单核苷酸多态性对MC2R转录调控的影响

婴儿痉挛症是婴儿期常见的癫痫脑病, 可致多数患儿出现严重认知功能障碍。ACTH是目前治疗该病首选药物。在前期遗传学研究中，我们发现并报道了MC2R（ACTH受体）基因启动子SNP与它的发病危险高度相关，最常见的一个TCCT单倍体具有保护作用，但影响机制不清。本研究拟在此基础上对该基因启动子区疾病相关多态性功能意义进行研究，具体包括（1）在体外细胞水平上进行MC2R启动子多态性对基因表达的单靶点调控的研究，确定是否多态性影响基因表达及对ACTH刺激有反应（2）通过分析不同基因型，在ACTH刺激后MC2R蛋白表达的变化，以及MC2R或受体辅助蛋白MRAP被抑制后，它们对ACTH反应性的改变，阐明ACTH反应性的敏感基因型（3）建立携带不同单倍体的转基因小鼠，在动物体内近一步证实体外研究的结果。预期将发现MC2R启动子多态性与功能的关系，旨在发病机理、药物靶点和个体化用药提供分子水平实验依据。

婴儿痉挛症是婴儿期常见的癫痫脑病，ACTH是目前治疗该病首选药物，我们发现并报道了MC2R（ACTH受体）基因启动子SNP与它的发病危险高度相关，本项目在此基础上进一步的研究。在任务书中我们保证完成三方面的内容：. .任务一：在体外细胞水平上进行MC2R启动子多态性对基因表达的单靶点调控的研究，确定是否多态性影响基因表达及对ACTH刺激有反应:.完成情况证实：MC2R启动子区发现4个多态性位点，-2T＞C是一个新发现的位点。3个SNPs（rs1893220, rs2186944和 -2T＞C）在病例及对照组间分布频率有显著统计学差异（P=0.045，P=0.015，P=0.009）。通过单体型构建发现常见单体型TCCT对婴儿痉挛症的发生有保护作用(P=0.0001)，且TCCT携带者比非携带者对ACTH治疗敏感(P=0.00003)，..任务二：通过分析不同基因型在ACTH刺激后MC2R蛋白表达的变化，以及MC2R或受体辅助蛋白MRAP被抑制后，它们对ACTH反应性的改变，阐明ACTH反应性的敏感基因型.完成情况证实：进一步的体外功能学研究证实MC2R基因启动子TCCT单体型可明显提高MC2R启动子的转录效率（TCCT型启动子转录效率是TCCC的4倍, P<0.001），且ACTH刺激后含TCCT单体型启动子MC2RmRNA表达上调5倍(P<0.001)，而含TCCC单体型启动子上调1.5倍 (P>0.05)。..任务三：建立携带不同单倍体的转基因小鼠，在动物体内近一步证实体外研究的结果。.完成情况证实：在MC2R-/-模型制备过程中，B6/N8 MC2R敲除小鼠生后2天几乎全部死亡.本实验先采用MC2R+/-小鼠进行实验。虽然在生长发育方面MC2R+/-小鼠与MC2R野生型小鼠无明显统计学差异，但在NMDA模型方面有一定的差别，尤其是在ACTH反应性方面，MC2R+/-小鼠对ACTH更敏感。..在项目执行中均已完成任务。发表论文 11篇 SCI 6 篇 中文7篇，培养博士研究生 4名