小反刍兽疫病毒结构蛋白N、F的线性表位精细扫描作图研究

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种山羊、绵羊等小反刍兽类的急性接触性A类传染病。该病作为一种重大的跨国动物疫病，已经严重地危害我国西藏乃至整个西部地区的动物生产和卫生安全。目前，对于PPR仍无有效的治疗手段，主要依靠流行病学调查和疫苗进行防控。抗原表位作图和表位最小基序鉴定对病毒性疾病检测和新型多表位肽疫苗研制具有重要的意义。因此本项目将用短肽生物合成肽法和抗重组蛋白多抗，对西藏株PPRV免疫原性强的N和F蛋白，开展全序列精细抗原表位作图研究，并用PPRV感染血清筛查全部表位中的抗体可及性或中和性表位，通过比对不同变型株同源蛋白序列，发现它们中的保守性表位，继而构建PPRV多表位肽检测抗原，建立特异灵敏和简便快速的PPRV感染检测新方法。本项目具有创新性，将为今后研制具有自主知识产权的新型PPRV多表位嵌合肽疫苗，以及后续开展PPRV全部编码蛋白的线性抗原表位组学研究奠定基础。

在本项目的支持下，我们按照任务书中的年度计划积极开展工作，已经完成了本项目的研究计划..小反刍兽疫（Peste des petits ruminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一种山羊、绵羊等小反刍兽类的急性接触性A类传染病。该病作为一种重大的跨国动物疫病，已经严重地危害我国西藏乃至整个西部地区的动物生产和卫生安全。目前，对于PPR仍缺乏有效的治疗手段，主要依靠流行病学调查和疫苗进行防控。抗原表位作图和表位最小基序鉴定对病毒性疾病检测和新型多表位肽疫苗研制具有十分重要的意义。本项目采用改良的生物合成短肽法和抗重组蛋白多抗，对西藏株PPRV免疫原性强的核衣壳蛋白质（N），开展全序列精细线性B细胞抗原表位作图研究。首先，综合运用DNAstar和RNA structure等软件对GenBank中西藏株小反刍兽疫病毒N基因进行密码子优化同义改造，通过2步PCR全化学合成PPRV N基因，将其克隆至原核表达载体并在大肠杆菌中可溶性表达。将纯化的重组PPRV N蛋白免疫新西兰大白兔，获得抗血清。利用制备的抗重组PPRV N蛋白抗血清，从64个覆盖N蛋白的全长序列的重组16肽片段中筛选获得19个免疫阳性重组16肽片段；并进一步的确定了反应性16肽的最小抗原基序；绘制出了小反刍兽疫病毒N蛋白的完全且精细的线性B细胞抗原表位图谱。比对不同变型病毒株同源蛋白序列，发现其中9个抗原表位基序为完全保守性表位基序。本研究首次绘制了动物病毒结构蛋白质的完全且精细的线性B细胞表位图谱；本项目的实施为今后研制具有自主知识产权的新型PPRV多表位嵌合肽疫苗和高灵敏度检测方法，以及后续开展PPRV全部编码蛋白质的线性B细胞抗原表位组学研究奠定了坚实的基础。