基于lncRNA差异表达的补肾降压方对自发性高血压大鼠微血管稀疏影响的分子机制研究

Microcirculation regulation is of great significance for hypertension and target organ damage. Microvascular rarefaction is the first step of target organ damage of hypertension. Microcirculation regulation is of great significance for hypertension and target organ damage. Previous researches have shown that, bushen jiangya decoction (BJD), a Chinese herbal medicine based on the therapeutic principle of tonifying kidney, could lower blood pressure smoothly and inhibit vascular endothelial cells (ECs) apoptosis and improve microvascular rarefaction. The mechanism maybe related to regulating the pathway of eNOS. Nevertheless, recent studies showed that lncRNA NOS3AS involved in the regulation of eNOS. So it is supposed that BJD could inhibit vascular ECs apoptosis by regulating lncRNA network. We aimed to investigate the molecular mechanisms of BJD on inhibiting vascular ECs apoptosis from the perspective of differences in gene expression between lncRNA and its key targets by establishing the typical models of spontaneously hypertensive rats (SHR) with microvascular rarefaction and SHR ECs. The study can offers the new ideas to find new treatments and new drug targets for treatment of hypertension, and provide the basis for hypertension management based on the therapeutic principle of tonifying kidney.

微血管稀疏是高血压诸多靶器官损害的第一步，微循环调节对于高血压病及其靶器官损害具有重要意义。我们的前期研究显示，基于补肾治法的补肾降压方能稳定血压、抑制内皮细胞（ECs）凋亡，从而改善微血管稀疏，其作用机制与调控eNOS信号通路表达有关。而最新研究表明，长链非编码RNA lncRNA NOS3AS也参与了eNOS的调控。因此，我们推测补肾降压方可能是通过调控lncRNA网络而达到抑制ECs 凋亡改善微血管稀疏的作用。本课题通过建立自发性高血压大鼠（SHR）微血管稀疏及SHR内皮细胞凋亡损伤模型，我们拟从lncRNA及其靶基因差异表达上揭示补肾降压方抑制自发性高血压大鼠ECs凋亡，从而改善微血管稀疏的分子机制。本研究可为补肾治法治疗高血压病提供科学依据，也可为临床治疗高血压病提供新的研究方法和新的药物靶点。

目前，随着经济发展及生活水平的提高，我国高血压病的防控与治疗仍不容乐观。血压升高是诸多心、脑、肾脏疾病如冠心病、脑出血及肾病综合征等的主要危险因素，也是导致炎症反应、血管及微血管并发症主要原因之一。微血管稀疏是由于高血压时引起血管反应性收缩, 高灌注致使高氧压干扰微血管生长, 末梢缺血后微血管变性萎缩, 从而引起微血管数量上的减少, 常见于各类型高血压动物模型及临床患者。微血管既是控制血循环阻力的主要场所，同时也是高血压形成靶器官损害的主要靶点。针对结构性、器质性微循环稀疏的改善，俨然成为高血压防治的新方向。长链非编码RNA (lncRNA)是一类位于细胞核内或胞浆内长度超过200 nt 的功能性RNA分子，越来越多的研究表明lncRNA的异常表达或功能缺失与心血管疾病、癌症及神经退行性疾病的病理进程密切相关，因此受到广泛关注，lncRNA或可成为降压药物新靶点，模拟lncRNA进行新药研发，将有可能为高血压病的治疗新靶点。因此，本实验研究主要分为两部分：一、实验研究部分，首先，采用自发性高血压大鼠微血管稀疏模型，将动态可视化技术应用到补肾降压方（颗粒剂）干预高血压微血管稀疏影响机制的研究中，观察补肾降压方对自发性高血压大鼠血压影响及肠系膜微循环影响；并运用激光多普勒线扫描成像技术记录补肾降压方可改善肾表面及肠系膜血流状况；并检测补肾降压方对血清细胞因子的影响。进而，从转录因子角度，采用基因芯片技术，对补肾降压方干预高血压微血管稀疏进行lncRNA-mRNA分析，筛选补肾降压方干预高血压微血管稀疏差异表达的lncRNA、mRNA，并通过构建基因间交互作用网络，探讨补肾降压方干预高血压微血管稀疏分子机制，为补肾降压方干预高血压微血管稀疏提供新靶点。二、采用血管紧张素II诱导HUVEC建立ECs凋亡损伤模型，排除体内复杂的生理因素，运用非编码RNA沉默/过表达与定位分析技术制备esiRNA，对lncRNA进行功能缺失研究。对筛选出的部分差异lncRNA 及其靶基因进行体外验证，为补肾治法治疗高血压病提供科学依据。