HBV去甘露聚糖修饰逃逸树突状细胞DC-SIGN免疫识别的研究

树突状细胞(DC)提呈HBV抗原功能缺陷和共刺激分子表达低下，是造成HBV感染慢性化的一个重要原因。本课题组前期实验证实：HBV感染可导致宿主细胞表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅰ（Golgi MⅠ）的活性增加，用基夫碱抑制宿主细胞Golgi MⅠ，其分泌的HBV颗粒可明显促进DC的活化和成熟，且抗原提呈能力增强，该效应均可被DC-SIGN特异性抗体所阻断。我们推测HBV感染可能导致宿主细胞Golgi MⅠ活性增高，通过剪切HBV蛋白N-寡糖，使DC表面识别甘露聚糖的受体DC-SIGN不能与HBV结合，从而限制DC的成熟和活化，进而导致HBV的免疫逃逸。本课题拟通过体内、外实验研究HBV去甘露聚糖修饰逃逸DC-SIGN的识别和摄取，限制DC活化及激活HBV特异性免疫应答的作用及其分子机制，以进一步阐明HBV感染免疫耐受的机制，为抗HBV免疫治疗提供新的靶点。

据报道在有甘露糖苷酶 抑制剂基夫碱存在时，HBV可以被DC细胞的特异受体DC-SIGN识别，而天然的乙型肝炎病毒（HBV）不能被识别。我们猜测天然HBV感染可能会上调宿主细胞α-mannosidase I的活性，进而逃逸DC-SIGN的免疫识别，导致HBV感染的持续存在。我们体内体外观察了HBV对一类甘露糖苷酶表达量的影响，并探讨了相关机制。我们的研究结果表明，HBV稳转细胞系、HBV转基因小鼠、慢乙肝患者肝脏组织中一类甘露糖苷酶表达量相对于对照组均增加。我们还发现了G2细胞转染HBs质粒后会增加MAN1C1表达，加用PPARα抑制剂MK886后，包膜蛋白HBs不能增加MAN1C1的表达。总之，我们的研究提示乙型肝炎病毒性体内体外均会增加一类α-甘露糖苷酶表达量，其中包膜蛋白会通过PPARα通路增加MAN1C1蛋白的表达。 同时我们观察HBV感染者外周血单个核细胞（PBMC）α-mannosidase I活性的变化，以及该变化与HBV感染临床病程和细胞免疫之间的关系。 本研究收集90名HBV感染者（根据临床病程分为免疫耐受组、慢性乙型肝炎组、非活动性HBsAg携带组）和30名健康对照者的外周血，Western Blot法检测α-mannosidase I三个亚型MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1的表达水平，ELISA法检测血清IL-12和IFN-γ水平以及乙肝血清学标志物，RT-PCR方法检测HBV DNA.使用SPSS软件进行统计学分析。和健康对照组相比，三个HBV感染者组MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1的表达均出现明显的上调，其中免疫耐受组的患者上调幅度最大（分别为0.66±0.19、0.66±0.18 和0.56±0.15，p＜0.05），CHB组次之。三个HBV感染者组IL-12和IFN-γ水平不同程度的高于健康对照组，其中以CHB组最高（IL-12：59.08±13.38 pg/ml ，IFN-γ：43.66±12.50 pg/ml，p＜0.05）。对于处于免疫耐受期的患者，MAN1A1、MAN1A2均与HBeAg和HBV DNA呈线性正相关，而MAN1C1仅与HBeAg相关。CHB组的相关性分析显示，MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1的表达与ALT无相关性（ p＞0.05），而与HBeAg和HBV DNA均呈正相关。