c-Src对钾通道TASK-1介导的缺氧性肺血管收缩反应调控机制研究

钾离子通道在介导缺氧性肺血管收缩反应（hypoxic pulmonary vasoconstriction，HPV）中发挥重要作用。酪氨酸蛋白激酶c-src参与血管收缩、细胞增值及缺氧等生理和病理过程。我们的前期研究发现，在人肺动脉平滑肌细胞上只表达缺氧敏感性双孔钾通道TASK-1；酪氨酸蛋白激酶c-src可能参与对人肺动脉平滑细胞TASK-1的调节。在前期研究工作的基础上，本课题拟从组织（人离体肺内动脉血管环）、细胞和分子水平三个层面，采取RNA干扰、免疫共沉淀、钙离子成像等分子生物学技术和全细胞膜片钳技术探讨：（1）TASK-1是否介导HPV；（2）c-Src是否通过调控TASK-1参与HPV；（3）c-Src通过调控TASK-1进而参与HPV的分子机制。本研究可能有助于为逆转肺血管的重塑提供潜在靶点和进一步阐明HPV离子机制，也为缺氧性肺动脉高压防治方法的探索提供实验和临床依据。

缺氧性肺血管收缩（hypoxic pulmonary vasoconstriction，HPV）是机体一种重要的代偿反应，同时缺氧信号可诱导血管细胞增殖和血管重塑，增加肺血管阻力，最终导致肺动脉高压和右心室衰竭。因此肺动脉平滑肌细胞的增殖和凋亡失衡在肺血管重塑的发生、发展过程起到关键性作用。抑制肺动脉平滑肌细胞增殖和诱导细胞凋亡已成为逆转肺血管的重塑和治疗肺动脉高压的一个新的治疗策略。钾离子通道在介导缺氧性肺血管收缩反应中发挥重要作用。酪氨酸蛋白激酶c-Src参与血管收缩、细胞增殖及缺氧等生理和病理过程。我们的前期研究发现，在人肺动脉平滑肌细胞细胞上只表达缺氧敏感性双孔钾通道TASK-1。酪氨酸蛋白激酶c-Src可能参与对人肺动脉平滑肌细胞TASK-1的调节。在前期研究工作的基础上，本研究从组织、细胞和分子水平三个层面，采取RNA干扰、免疫共沉淀、钙离子成像等分子生物学技术和全细胞膜片钳技术主要研究：1、组织水平上，观察TASK-1和c-Src抑制剂对缺氧所致肺内血管环张力改变的影响；2、细胞水平上，观察缺氧处理前后c-Src对TASK-1电流影响；3、分子水平上，观察缺氧处理前后c-Src对人肺动脉平滑肌细胞膜上TASK-1调控作用，探讨c-Src调控钾通道TASK-1介导缺氧性肺血管收缩反应的分子机制。. 本研究发现：组织水平上利用人肺内动脉血管环，给予TASK-1或c-Src 阻滞剂、酪氨酸磷酸酯酶抑制剂，发现TASK-1和c-Src在缺氧所致离体肺内动脉血管环张力改变的影响中所起的作用，证实c-Src和TASK-1在缺氧性肺血管收缩反应中起到重要作用，c-Src 阻滞剂显著增加离体灌流肺内的压力。细胞水平上，发现c-Src和TASK-1共同表达在细胞膜上，在缺氧条件下，酪氨酸激酶c-Src参与人肺动脉平滑肌细胞膜上钾离子通道TASK-1调节，急性、慢性缺氧对人肺动脉平滑肌细胞双孔钾通道TASK-1蛋白质和TASK-1mRNA及平滑肌细胞增殖的影响。离子机制上，发现缺氧对c-Src磷酸化及TASK-1通道磷酸化起调控作用，c-Src 阻滞剂和RNA干扰可减弱缺氧所致细胞内钙离子浓度增加。. 本研究为逆转肺血管的重塑提供潜在的靶点，进一步阐明了HPV的离子机制，也为缺氧性肺动脉高压防治提供了新的实验资料和临床依据。