黄连解毒汤治疗脑卒中的定量组分配伍研究

脑卒中是一种严重威胁人类健康的恶性疾病。本课题以临床治疗脑卒中有确切疗效复方-黄连解毒汤为研究对象，在前期工作的基础上，首次以药味、部位、活性物质三个层次的组分配伍优化为切入点，根据复方多成分、多靶点、整体作用的特点，综合运用系统科学、计算科学、非线性科学等多学科交叉融合手段处理其化学组成信息和药效活性信息，创新发展中药有效组分智能辨识方法、基于定量组效关系建模的中药有效组分配伍优化方法。结合脑卒中疾病的特点，采用多种整体动物和细胞模型进行综合评价，变模糊判断为量化评价，探讨黄连解毒汤组分配伍与其生物效应的谱效关系，构建黄连解毒汤治疗脑卒中的质量标准和评价体系。本课题的实施不仅可揭示黄连解毒汤治疗脑卒中的物质基础，而且为建立基于整体观、符合中医药特点和具有普适性的中药复杂药效物质研究关键技术与方法学体系，为研发符合中药复方特点的质量可控、低毒高效、符合现代需求的创新中药探索了一种新的模式。

脑卒中在中医中称“中风”具有高发病率、致残率、死亡率和复发率等特点，严重威胁患者的生命和生活质量，给社会和家庭带来巨大的压力。热毒是中风发病的关键因素，其微观基础为中风级联反应中所产生的大量病理产物，其发生发展与免疫炎症机制息息相关。黄连解毒汤为清热解毒的代表方，近年来临床与基础研究方面都证明黄连解毒汤治疗脑卒中有良好前景。.本项目利用多学科交叉的优势，在药味、部位、活性物质三个层次进行黄连解毒汤治疗脑卒中的组分配伍优化，探讨了黄连解毒汤治疗脑中风的作用机制和代谢谱特征。首次证实黄连解毒汤可能是通过调控MAPK家族—Akt-非依赖型信号通路，抑制mTORC1活化，进而激活自噬，发挥脑保护作用，黄连解毒汤没有抑制反而促进Akt信号通路的活化，对其治疗效果有益，避免了抑制Akt信号通路所带来的副作用。.发现了脑卒中及黄连解毒汤的治疗存在性别差异，缺血性中风在雄性动物中更严重，雌性动物更能耐受，雌性动物从黄连解毒汤的治疗中获得更大的收益，这一发现表明在卒中的治疗和疗法的发展中需要考虑到性别差异。应用核磁代谢组学的方法成功比较了正交设计黄连解毒汤九种配方对脑卒中大鼠的治疗作用，找到了对脑卒中大鼠治疗效果最好的配方组合。.探讨了黄连解毒汤中活性物质的七种不同组合治疗脑卒中的分子机制。应用核磁代谢组学结合病理观察、生化指标、分子生物学方法。得出小檗碱+黄芩苷+栀子苷组（ABC组）大鼠治疗效果最好的结论，这一组合的三个化合物恰好是黄连解毒汤中四味单味药的主要成分，这也说明了黄连解毒汤组方的合理性。ABC组对局灶性缺血再灌注脑损伤大鼠有确切的神经保护作用，可抑制脑缺血再灌注损伤后的神经元凋亡及死亡，减小脑梗死体积，改善神经功能。ABC组能够增强p-Jnk和p-P38、凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3和 cleaved-caspase 7及转录因子 Nrf2、HO-1的表达水平，降低 Caspase 3, Caspase 7 蛋白的表达。ABC的神经保护主要通过抗氧化及抗凋亡的作用实现。其通过MAPK途径调节凋亡相关蛋白及抗氧化酶（如激活 Nrf2/HO-1通路）的表达可能是其实现神经保护作用的重要机制之一。.本项目的研究成果表明了黄连解毒汤治疗脑卒中的良好效果，也说明了对其进行组分配伍优化的可行性和有效性，为黄连解毒汤和其他复方进一步的开发利用提供了有益的启示。