新发人持续性G病毒II型复制和感染细胞培养模型的建立及与HCV/HIV共感染的机制研究

Human pegivirus type II (HPgV-2), a positive strand RNA virus, was identified in hepatitis C patients in 2015. At present, there is no cell culture model for HPgV-2. Its association with human diseases and its replication mechanism remain to be elucidated. Our preliminary results indicate that HPgV-2 infection is tightly associated with hepatitis C virus (HCV), in particular HCV and human immunodeficiency virus (HIV) co-infection. Furthermore, HPgV-2 does not contain an intact core protein, which suggests that it may be a defect virus. Therefore, we propose that HPgV-2 needs the help of HCV for its efficient replication through HCV core protein trans-complementation. HIV can enhance HCV replication, which in turn supports the establishment of HPgV-2 infection. The goal of this study is to develop HPgV-2 permissive cell culture models by constructing HPgV-2 molecular infectious clone and screening appropriate cells to establish efficient replication cell system for HPgV-2. The cell culture model will be used to investigate HPgV-2 replication, to elucidate the role of HCV and HIV in HPgV-2 replication, and is of great importance and significance.

人持续性G病毒II型(HPgV-2)是2015年新发现的黄病毒科病毒，尚无可进行基因操作的病毒感染性克隆和复制子以及细胞培养模型，限制了对其生命周期及复制机制的研究。HPgV-2是单股正链RNA病毒，基因组高度保守，但核心抗原不完整，提示HPgV-2可能是复制缺陷性病毒。我们的研究发现，HPgV-2与丙型肝炎病毒(HCV)，特别是HCV和人免疫缺陷病毒(HIV-1)共感染密切相关。因此，我们推测HPgV-2的复制可能需要HCV辅助，HIV-1可促进HCV复制而利于HPgV-2建立感染。为研究HPgV-2的复制机制并检验我们的假设，本项目将构建HPgV-2全长cDNA克隆和复制子，筛选合适细胞株，建立细胞培养模型，探讨HPgV-2复制以及和HCV/HIV-1共感染的机制。为深入研究HPgV-2的致病性、病毒与宿主相互作用以及多病毒共感染的机制等提供必需的研究平台，具有重要的科学意义。

人持续性G病毒II型(HPgV-2)是2015年新发现的黄病毒科病毒，缺乏对其感染自然史和生物学特性的研究。HPgV-2与丙型肝炎病毒(HCV)共感染密切相关，但HPgV-2基因组高度保守，其分子机制尚不清楚。目前尚无可进行基因操作的HPgV-2感染性克隆和复制子以及细胞培养模型，限制了对其生命周期及复制机制的研究。本项目围绕HPgV-2感染性克隆的构建、HPgV-2感染自然史和生物学特性以及HPgV-2基因组保守性的分子机制开展研究，从不同患者样本中扩增获得HPgV-2基因组，分别构建了含HPgV-2全基因组、非编码基因组、HCV/HPgV-2嵌合基因组的质粒，以期获得HPgV-2感染性克隆、复制子或者HCV/HPgV-2嵌合复制性克隆。从HPgV-2感染者外周血和肝组织穿刺样本确定了HPgV-2感染的淋巴细胞嗜性，阐明了HPgV-2感染自然史，表明约30% HPgV-2感染者为慢性感染，但HPgV-2感染并没有加重肝脏损伤。采用高通量序列分析方法证实HCV宿主内单碱基变异（iSNV）较HPgV-2高，体外RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）反应系统分析证实HPgV-2 RdRp较HCV RdRp催化基因复制的保真性高，且对抗HCV药物索非布韦不敏感。我们的研究结果为认识持续性G病毒的生物学特性提供了新的数据，为深入研究HPgV-2的致病性、病毒与宿主相互作用以及RNA病毒变易机制等奠定了基础。