Th17细胞在小鼠病毒性心肌炎发病机制中的作用

本项目探讨Th17细胞在小鼠病毒性心肌炎（VMC）发病中的作用。研究发现Th17细胞在实验性自身免疫性心肌炎（EAM）发病中起着重要作用，本课题组在VMC小鼠和扩张型心肌病患者检测到IL-17表达，但Th17细胞在VMC发病中作用尚不清楚。本项目建立柯萨奇病毒B心肌炎小鼠模型，应用流式细胞术、RT-PCR及Western blot等方法检测不同时期Th17细胞及其相关细胞因子；分离纯化VMC小鼠脾CD4+T细胞、巨噬细胞进行体外培养，检测STAT3、RORγt、IL-17、IL-6等相关因子。探讨VMC小鼠Th17细胞的变化规律、STAT3信号途径介导的分化机制及IL-17对其他细胞因子的影响。用抗IL-17抗体、IL-17-/-小鼠两种方法阻断小鼠VMC模型体内的IL-17作用，观察小鼠VMC模型病理改变以及相关细胞因子的变化。本项目对阐明VMC的发病机制和寻求新的治疗靶点具有重要意义。

1）VMC小鼠不同时期Th17细胞及其相关因子的变化：VMC小鼠1-6周脾中均可检测到Th17细胞，峰值在第4周出现，其相关细胞因子IL-17、IL-23、IL-6和TNF-α mRNA和蛋白在小鼠VMC1-6周的心肌组织及血清中表达升高,其中IL-17、IL-23 mRNA和蛋白表达高峰在4周时出现，而IL-6和TNF-α mRNA和蛋白表达高峰在2周时出现，提示Th17细胞及其细胞因子可能在VMC发病中起到重要作用。.2）抗IL-17单克隆抗体对小鼠VMC模型的干预作用：VMC小鼠出现症状后（CVB3感染4天）应用单克隆抗体中和IL-17，可以延缓VMC的病程、减轻心肌炎症、改善生存率。.3）IL-17A基因敲除对VMC小鼠心肌炎症影响：IL-17A基因敲除有助于减轻小鼠CVB3感染后心肌的炎症反应，其机制可能与促进Th1细胞分化及其效应分子IFN-γ的表达，增强抗病毒免疫以及减少炎性介质浸润减轻自身免疫反应有关。 .4）STAT3信号途径介导的小鼠VMC中Th17细胞分化的机制：小鼠VMC发病过程中STAT3信号途径明显活化，提示STAT3信号转导通路介导了VMC中Th17细胞的分化。.5）STAT3特异性抑制剂对VMC小鼠脾Th17细胞分化的影响：STAT3特异性抑制剂S3I-201可抑制VMC小鼠脾中已分化Th17细胞的增殖。.6）细胞因子对VMC小鼠脾Th17细胞的影响：IL-23是维持Th17细胞增殖的必要因子，TGF-β和/或IL-6并非维持VMC小鼠脾Th17细胞增殖的必要因子。.7）IL-17对VMC小鼠脾脏巨噬细胞分泌细胞因子的影响：IL-17可能通过刺激VMC小鼠巨噬细胞分泌TNF-α及IL-1β等因子，从而发挥促进炎症、损伤心肌的作用。.8）IL-17对脾淋巴细胞分泌的细胞因子的影响：IL-17对VMC小鼠脾淋巴细胞中Th1细胞分化及IFN-γ的分泌起到抑制作用。.9）Th17/Th9细胞、Th22细胞IL-17+/γ-IFN+双阳性细胞在VMC中的变化：Th9 细胞及IL-17+/IFN-γ+细胞可能与VMC 的炎性过程无关，而Th22细胞可能通IL-22/IL-22R途径对VMC起保护作用。