LRIG1与人脑胶质瘤化疗多药耐药性的相关性及机制研究

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样区1（LRIG1）是近年发现的一种内源性多酪氨酸激酶受体（RTK）抑制剂，而RTK抑制剂可能与化疗敏感性有关。我们近期研究中发现人脑室管膜瘤LRIG1的表达与抗氧化物酶、拓扑异构酶（topo II）及原癌基因BCL-2相关。因抗氧化物酶、Topo II、BCL-2均与肿瘤化疗耐药性有关，因而LRIG1极可能与脑胶质瘤化疗的耐药性/敏感性有关。本项目拟建立人脑胶质瘤的依托泊苷（VP-16）和化疗新药替莫唑胺（TMZ）耐药细胞模型，研究LRIG1与人脑胶质瘤化疗耐药或多药耐药性（MDR）的关系，并研究其可能的机制是否为LRIG1负反馈抑制topo II或BCL-2有关。由于RTK抑制剂的研发是当今抗脑胶质瘤治疗研究的前沿，本项目有助于促进LRIG1治疗脑胶质瘤的临床研发，并有助于研究联合应用分子靶向治疗和化疗治疗脑肿瘤的新方法，为胶质瘤的治疗开辟新的途径。

目的：研究多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1)是否可以提高人脑胶质瘤的化疗敏感性及其可能机制。方法：构建布有各级人脑星形胶质细胞瘤标本的组织芯片，免疫组化法研究LRIG1和化疗耐药相关基因的表达相关性。以U251细胞株为亲本细胞，采用浓度递增法诱导建立多药耐药细胞株U251/MDR,CCK-8法检测其多药耐药性，将LRIG1质粒转染进入U251/MDR,CCK-8法检测其化疗敏感性的变化。RT-PCR法检测U251/MDR中相关耐药相关基因的表达变化，针对这些表达发生变化的基因，逆转其表达后检测细胞化疗敏感性的变化。采用脂质体转染的方法调高或降低化疗耐药相关基因的表达，Western blot检测另外一些化疗耐药相关基因的表达情况，最终确定LRIG1提高胶质瘤化疗敏感性的机制。结果：免疫组化结果显示LRIG1的表达与MnSOD和BCL-2的表达成负相关；成功建立多药耐药细胞株U251/MDR,其对替莫唑胺、环磷酰胺、硫酸长春新碱、阿霉素和VP-16均有耐药性，将LRIG1质粒转染进入U251/MDR后其多药耐药性被部分逆转；RT-PCR结果显示：LRIG1在耐药细胞株中表达降低，而BCL-2、topoII、MRP5、MDR1在U251/MDR中的表达上升；将LRIG1质粒转染进入U251/MDR后，Western blot检测BCL-2、topoII、GDNF的表达下调，沉默LRIG1后，BCL-2、topoII、GDNF的表达上升。结论：LRIG1可以提高胶质瘤的化疗敏感性，其机制可能与LRIG1负反馈抑制BCL-2、topoII、GDNF的表达有关。