补肾化痰活血法对EAE小鼠少突胶质细胞前体细胞的影响及促髓鞘再生的作用机制研究

少突胶质细胞前体细胞(OPCs)是中枢神经系统成体干细胞的一种，其增殖分化是髓鞘再生的关键，在多发性硬化(MS)神经功能损伤修复过程中具有重要作用。本研究以实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）C57BL/6小鼠为MS模型，采用Olig2/BrdU双标技术观察OPCs的增殖分化情况，采用免疫组化、ELISA、RT-PCR技术检测与OPCs增殖分化密切相关的FGF-2、IGF-1、Caspase3等因子的合成以及部分因子的基因表达情况，LFB染色观察髓鞘脱失情况，Bielschowsky银染观察轴索变化。综合神经病理观察及上述因子的变化，从组织、细胞、分子三个不同层面研究补肾化痰活血法对OPCs增殖分化的干预机制，阐述上述因子及其基因表达与OPCs增殖分化的内在联系，探讨补肾化痰活血代表方二黄胶囊促进MS/EAE髓鞘再生、改善神经功能损伤的机理，为中医药治疗MS提供科学依据。

以MOG35-55诱导C57BL/6小鼠制作EAE模型，从小鼠发病率、潜伏期、体重变化、神经功能评分以及神经病理观察等诸多方面综合分析，EAE模型已经成功建立。二黄胶囊可以有效改善EAE小鼠临床症状和神经功能评分，降低死亡率，促进神经功能恢复，减轻CNS髓鞘脱失程度。二黄胶囊明显促进小鼠脑和脊髓特定部位少突胶质细胞前体细胞的增殖，显著增加Olig2基因和蛋白表达，促进少突胶质细胞前体细胞的分化，并促进星形胶质细胞的增生和活化，减少凋亡因子的表达，增加CNS各种神经生长因子的释放，为髓鞘的修复和再生提供有利条件。二黄胶囊还可以通过调节多种炎性因子的表达和释放来减轻EAE的炎症反应程度。.本研究以EAE小鼠为研究对象，重点在于动态观察补肾化痰活血方剂二黄胶囊对EAE小鼠少突胶质细胞前体细胞增殖与分化的影响。采用免疫组化、免疫荧光观察少突胶质细胞前体细胞在病变区及周围区域的分布及数量，RealTime rt-PCR、Western Blot、ELISA等技术检测Olig2、MBP、GFAP、Caspase3、IGF-1、FGF-2、BrdU等指标的合成以及基因和蛋白表达情况，结合病理染色，探讨MS/EAE中医病机肾阴不足、痰热瘀阻的科学内涵和二黄胶囊促进少突胶质细胞前体细胞增殖分化、修复神经损伤的机理，为二黄胶囊从滋阴补肾、化痰活血入手治疗MS提供实验数据和科学依据。