哮喘分期序贯治疗对气道重构的ASMC增殖周期调控机制影响的研究

基于前期研究基础，通过复制哮喘动物模型，用计算机图像分析、流式细胞技术，ELISA法、免疫组化法、RT-PCR技术等技术，从多靶点上探讨中医温肺化痰- - -化痰养阴- - -滋阴补肾分期序贯治疗对小儿哮喘气道重构的气道平滑肌细胞（ASMC）增殖周期调控及相关的分子生物学机制。观察哮喘气道重构时ASMC增殖周期时相分布和相应细胞周期调节蛋白（CCRP）的表达水平、血清及BALF中ICAM-1、IL-4、IL-5、IL-12、IL-13、IL-17、IFN-γ及EOS的含量、肺组织中TGF-β1、CTGF、NGF、CysLT1mRNA及MMP-9及TIMP-l的表达等指标。通过评价、判别、分析研究结果，将阐明中医治病求本，改善哮喘预后的机制，为发挥中医药防治哮喘的优势作用提供临床实验依据。本课题的研究有利于广西区域基础研究人才的培养，推动民族地区人口健康事业的进步，符合国家统筹区域发展的重大战略。

支气管哮喘（简称哮喘）不仅存在气道的慢性炎症，而且还可发生气道结构的改变，即气道重构。气道重构是导致哮喘患者不可逆性气流阻塞及持续性非特异性气道高反应性（AHR）的重要原因。采用以气道吸入糖皮质激素抗气道炎症是近年来GINA方案的主要治疗方法。然而吸入糖皮质激素对哮喘发病中全身免疫功能紊乱的机制并无相应调节作用；而在小儿群体中，由于对吸入疗法依从性等问题使得其在儿科临床应用存在一定的局限性。.中医学关于哮喘的记载有着近两千多年的历史，在防治哮喘方面积累有丰富的经验，中医学主张对哮喘的治疗不仅是发作期以治标，更重要的是强调缓解期的扶正固本治疗，主要体现在未病体质调节阶段及已病后缓解期的治疗。基于临床与实践的证实，运用中医序贯治疗小儿哮喘的方法更体现了中医治病求本的辨证思维。运用中医温肺化痰—化痰养阴—滋阴补肾分期序贯治疗，能否更有效的在哮喘防治中起到延缓或阻止气道重构的进程，需要临床循证及实验依据。.本研究主要是采用现代科技手段，建立哮喘动物模型，从多靶点上探讨中医温肺化痰—化痰养阴—滋阴补肾分期序贯治疗对小儿哮喘气道重构的气道平滑肌细胞（ASMC）增殖周期调控及相关的分子生物学机制。研究结果证明：中医分期序贯治疗对防治哮喘气道重构有积极的促进作用：（1）抑制哮喘大鼠肺组织白三烯受体I及白三烯C4、D4炎症介质的表达；（2）降低哮喘大鼠肺组织中MMP-9 及其抑制剂的表达，调节两者比值达到阻止气道重构的作用；（3）下调哮喘ASMC内正性CCRP cyclinA和cyclinB的表达和上调负性CCRPP27 kip-1的表达，影响ASMC通过G1/S和G2/M细胞周期限制点，而抑制哮喘ASMC的增殖和气道平滑肌层的增厚、减缓气道重构的发展。.本研究的科学意义在于：采用多种技术手段。从细胞分子水平、分子水平与基因水平上探讨中医分期序贯治疗对小儿哮喘气道重构的气道平滑肌细胞（ASMC）增殖周期调控及相关的分子生物学机制。并验证了本课题首先提出的“温肺化痰-化痰养阴-滋阴补肾”的中医分期序贯治疗哮喘的科学性，对今后挖掘整理中医药防治小儿哮喘，更好的发挥中医药在防治哮喘中疗效可靠、经济安全、改善哮喘患儿生活质量等优势作用提供科学的临床实验依据。