经穴反应性时间特征的嘌呤信号-成纤维细胞调控机制研究

Acupoint reactivity is the initial tache of acupuncture therapy. The temporal specificity of acupoint reactivity is one of important influence factors of acupoint reactivity.It is also the core theory base to establish chrono-acupuncture. Recent studies found that ATP, as a representative of the purinergic signal is the key information of biologic clock, can induce cytoskeleton remodeling of the fibroblast in the subcutaneous tissue. So this project ，based on the concluding NSFC project revealled the central core mechanism on temporal response characteristics of acupuncture regulating rhythms ，choosed pain syndrome that temporal effect of acupuncture is definite as the carrier, integrated applied the methods and technology of modern chronobiology, electrophysiology, conditions knockout, morphology and molecular biology , Research on the linking of difference of acupoint reactivity and dynamic remodeling of fibroblasts induced by purinergic signal to explore the purinergic signal transduction mechanism of the temporal features of acupoint reactivity. The study expected to explain the scientific connotation of core theory of chrono-acupuncture and the results of the study not only for enriching and developping the chrono- acupuncture theory, and to optimize the acupuncture time, improve the clinical effect of which have important practical value, also is a continuation and prolongation of the last NSFC project.

经穴功能动态变化的时间特异性是影响经穴反应性的重要因素，也是创立时间针灸学的理论核心。最新研究发现细胞外嘌呤信号介导成纤维细胞应力后细胞骨架动态重构的关键信号，亦是机体时间结构的信息物质基础。结合前期研究发现针灸节律调整作用时间特征的中枢分子钟机制，围绕"经穴反应性的时间特征可能与细胞外具有节律性变化ATP调控的穴区成纤维细胞的动态重塑有关"的假说, 以外周生物钟为切入点，选择时间针灸效应明确的痛证为载体，采用时间生物学、电生理学、细胞生物学等方法，从针灸时间效应的始动环节入手，研究不同时间针刺经穴反应性与成纤维细胞动态重塑的关联性，并从具有成纤维细胞重塑及节律调控双重作用的嘌呤信号挈入，揭示经穴反应性时间特征的嘌呤信号调控机制，有望阐释时间针灸学核心理论的科学内涵，研究结果对丰富和发展时间针灸理论具有重要科学意义，对优化针灸时间、提高临床疗效具有重要实践价值，是上一个项目的延续和发展。

经穴功能动态变化的时间特异性是影响经穴反应性的重要因素，也是创立时间针灸学的理论核心。细胞外嘌呤信号是介导成纤维细胞应力后细胞骨架动态的关键信号，亦是机体时间结构的重要信息物质。本课题选择炎性痛模型及P2X7-/-基因敲除小鼠为载体，采用时间生物学、电生理学、分子生物学、组织形态学等方法，研究经不同时间针刺经穴反应性与穴区成纤维细胞动态重塑的关系及其嘌呤信号调控机制。研究结果提示：经穴在不同时间点对相同针刺刺激的反应性不同，其动态特征表现为经穴对针刺应答光期强于暗期，其中应答最强的时间集中在光期末期（ZT8，ZT12），最弱的时间出现在暗期的末期（ZT16）。经穴反应性的时间动态变化与穴区成纤维细胞骨架重构的时间差异有关。光期末期（ZT8，ZT12）针刺对穴区成纤维细胞骨架重构的作用最强，在暗期的末期（ZT16）对其的调整作用最弱；不同时间点针刺对成纤维细胞骨架蛋白表达量的影响不同，其中表达量最高的点在ZT12，表达量最低点为ZT4。经穴反应性动态特征与不同时间点针刺穴区ATP的动态变化成正相关，穴区P2X7受体参与了针刺对穴区成纤维细胞细胞骨架的重构；经穴反应性时间动态变化可能与针刺后对穴位局部、背根神经节、脊髓兴奋的TRPV家族成员及数量有关；并且不同时间针刺对穴区成纤维细胞骨架重构的不同调控效应与其对骨架蛋白表达相关信号分子的调整作用不同有关，即 ZT12时间点针刺对降低HSP27、p-p38MAPK、MAP4含量变化幅度的调控大于ZT16时间点, 同时对降低p38MAPK含量变化幅度的调控小于ZT16时间点。研究结果可为临床选择最佳治疗时间，优化针灸时间处方提供支撑，具有重要的临床意义；亦为传统穴位定时开合的理论提供了科学证据，丰富了传统腧穴理论；揭示了经穴功能态时间特异性的部分生物学机制，对阐释时间针灸的科学内涵具有重要的学术意义。