基于调节β-淀粉样蛋白分解酶活性的开心散防治AD的机制研究

With an ageing population， Alzheimer's disease (AD) prensents a high-risk trend, unfortunately, there is no ideal treatment drug. Our previous results show that Kaixin San,a traditional chinese famous classic formaula, promote Aβ degrading in brain of rat，as we know,Abeta accumulates because of imbalance between the production of Abeta and its removal from the brain in AD,and more than 90% of sporadic type patients with AD (not hereditary) has no genetic change to produce A β too much, therefore, "Aβ-degrading enzymes" become the reasonable selection of research. It is first time for this study to explore regulating effect of Kaixin-San on Aβ-degrading Enzymes to investigate its pharmacological mechimism in AD, The method of injecting Aβ in brain of rat was selected to establish model of AD, accordingly ,protein and gene expression(mRNA) of Neprilysin（NEP）、Insulin-degrade enzyme（IDE）、Angiotensin??Convert Enzyme (ACE)、Endothelin-Convert Enzyme(ECE)，which are close to Aβ degradation, were detected by RT-PCR and Western Blot , Through these methods, the interaction regulation of KaixinSan promoting the Aβ degradation was clarify objectively and systematacially, and which can not only evaluate the pharmacological mechimism of Kaixin San ,but also provide a new theoretical basis and target of drug action for prevention and treatment of AD.

AD随人口老龄化而呈高发趋势，且尚无理想的治疗药物。前期研究结果表明，开心散具有促进脑内Aβ分解的作用。脑内Aβ的水平存在动态平衡，产生过多或分解减少均可引起Aβ沉积形成老年斑进而诱发AD。由于90%以上的散发型AD患者（非遗传性）并无Aβ产生过多的基因学改变，因此，"Aβ分解酶"成为研究的合理选择。本研究首次从"Aβ分解酶"角度研究经典方开心散防治AD的作用机制，采用脑内注射Aβ的方法，通过RT-PCR 和Western blot法检测Neprilysin、IDE(Insulin-degrade enzyme)、ACE(Angiotensin Convert Enzyme)、ECE(Endothelin-Convert Enzyme)等与Aβ分解相关的四大酶类的mRNA和蛋白表达水平，从分子水平客观评价开心散促进脑内Aβ分解的规律及防治AD的作用机制，为研究新药提供了新的依据与靶标。

β-淀粉样蛋白（Aβ）的异常增多是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)重要的病理过程。生理状态下脑内Aβ的水平存在着产生与清除的动态平衡。病理状态下，产生过多或（和）分解减少均可引起Aβ异常增多，成为诱发AD的重要原因。由于占AD总发病率95%以上的散发型AD患者（非遗传性）并无Aβ产生过多的基因学改变，因此，Aβ清除障碍可能是引起Aβ异常增多，进而引发AD的重要病因之一。作为分解Aβ的蛋白酶-Aβ分解酶，其功能障碍可能成为Aβ清除减少的重要原因，因此，基于调节Aβ分解酶活性的药物研究可能为AD的治疗提供了新的方向。本项目试图从调节“Aβ分解酶”的角度，从分子水平客观评价开心散促进脑内Aβ分解的作用及防治AD的作用机制。 . 本项目研究了开心散对海马齿状核注射Aβ诱导的拟AD模型大、小鼠的认知功能障碍的改善作用及对Aβ引起的海马神经元损伤的保护作用；通过对海马注射后的Aβ浓度的动态观测，研究开心散的对外源性Aβ的加速分解作用；通过对脑内Aβ降解酶-脑啡肽酶（NEP）、胰岛降解酶（IDE）、血管内皮素转化酶-1（ECE-1）及血管紧张素(ACE)的蛋白及基因表达测定，阐明开心散加速Aβ降解的分子生物学机制。. 本项目的研究结果显示，开心散对Aβ诱导的大、小鼠认知功能障碍均有明显的改善作用，并缓解由Aβ注射引起的海马神经元损伤；通过分析Aβ的“浓度-时间”曲线，发现给予开心散后，各时间的Aβ浓度与模型组比较均降低，对该曲线进行拟合后我们发现，给药后的Aβ分解速率显著加快；对Aβ降解酶的蛋白表达检测结果显示，开心散能显著提高NEP和IDE的蛋白表达，而对ECE-1及ACE并无影响；而RC-PCR的结果显示，开心散以上四种分解酶mRNA转录水平并未明显作用。以上结果提示，开心散通过上调海马区Aβ降解酶NEP、IDE的蛋白表达，加速了Aβ的降解，通过降低Aβ的水平，缓解神经元损伤，最终改善了动物的学习记忆功能。. 本项目为开心散防治AD的作用机理提供了全新的解释。直接作用于Aβ，加速其分解。因此，许多基于Aβ的开心散多靶点作用可能与开心散直接加速Aβ分解有关；此外，鉴于Aβ在AD发病机理中的“源头”因素，我们有理由相信开心散在防治AD的新药侯选药物中具有巨大的开发潜能。