钙离子通道在子宫内膜癌细胞上皮间质转化中的作用机制研究

The mechanism of the metastasis of endometrial carcinoma (EC) was not clear till now. Recently, epithelial-mesenchymal transition (EMT) was found to be the primary manner in the metastasis of epithelial malignant tumor. E-cadherin took on an important role in the process. The action of E-cadherin was calcium dependent. We have found that the concentration of calcium in the EC cell changed rapidly with the applying of estrogen. But the ralationships of calcium concentration, calcium channel and the EMT of endometrial carcinoma were not clear..So, the main contents of this study included the changing of calcium concentration and calcium channel during EMT of EC, the impact of calcium channel on EMT, and if calcium channel blocker could hold back the invasion and matastasis of EC..The main object of the study is to help discover the mechanism of invasion and matastasis and to direct the clinical therapy of EC.

子宫内膜癌的转移机制尚不清楚，近年发现，EMT是上皮细胞恶性肿瘤最主要的转移机制。E-cad在EMT进程中发挥重要作用，E-cad生物学效应的发挥为钙离子依赖。本课题组发现内膜癌细胞在雌激素作用下，产生钙离子浓度的快速变化，但钙离子浓度变化及钙通道与子宫内膜癌EMT是何关系尚不明确。.因此，本研究的重点研究内容是：子宫内膜癌细胞EMT进程中钙离子浓度和钙通道的变化，以及钙通道变化对EMT的影响，以明确钙离子浓度变化来源以及钙离子通道能否影响子宫内膜癌细胞侵袭和转移的生物学行为。.主要目的是通过研究子宫内膜癌EMT与钙离子通道的关系，协助揭示内膜癌侵袭和转移机制并指导临床治疗。

利用TGF-β及17β-E2分别处理ER不同状态的Ishikawa和HEC-1A细胞，检测两种细胞中E-cad、N-cad和Vimentin蛋白的表达，以及E-cad和N-cad基因的表达，证明TGF-β确能诱导子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A发生上皮间质转化，虽然雌激素作用与子宫内膜癌的发病相关，但并不明显影响转移，与临床发现的情况一致。. 在子宫内膜癌Ishikawa细胞中，TGF-β可以引起细胞内钙离子浓度增高和钙离子通道Cav1.3蛋白表达增高，RNAi敲减钙离子通道Cav1.3后，TGF-β并未引起钙离子浓度的升高，也不能使Cav1.3的表达增高，提示TGF-β引起钙离子浓度的升高与L型钙离子通道Cav1.3有关。. Ishikawa 细胞有效敲减钙离子通道Cav1.3后，E-cad 蛋白表达增加，N-cad蛋白表达降低，TGF-β作用于敲减Cav1.3的细胞后，并没有使E-cad 蛋白表达明显降低，亦未使N-cad蛋白表达明显升高，而阴性对照NC组细胞N-cad的表达升高。. TGF-β诱导Ishikawa细胞，明显增加细胞体外迁移能力，敲减钙离子通道Cav1.3后Ishikawa细胞的穿膜细胞数明显减少，提示Cav1.3能够促进TGF-β诱导的子宫内膜癌细胞的体外迁移。. TGF-β作用后p-Akt的表达明显增强，siRNA 敲减Cav1.3 明显抑制了TGF-β对p-Akt的活化作用，说明TGF-β是通过Cav1.3引起下游的Akt磷酸化参与子宫内膜癌细胞EMT的发生。