草地贪夜蛾卵巢细胞中新caspase的鉴定及功能研究

草地贪夜蛾卵巢细胞 (Sf9)是昆虫细胞和杆状病毒凋亡相关研究最常用细胞。遗憾的是，Sf9细胞凋亡信号传导途径仍不清楚，这使苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcMNPV与Sf9凋亡相关因子的相互作用至今仍未阐明，Sf9中caspase的鉴定是该问题的瓶颈。Sf-caspase-1是Sf9中唯一被鉴定的caspase，多项研究表明，Sf9还有其它caspase，国际上（包括申请人）已发表论文中称之为Sf-caspase-X，但常规方法至今未能鉴定甚至检测到Sf-caspase-X。申请人成功地用人工合成的caspase抑制剂标记并检测到Sf9中多种活化caspase，并证明了所用方法的特异性，这是证明除Sf-caspase-1外，Sf9还有其它caspase的第一个直接证据。本项目拟以此为基础，鉴定Sf9中新的caspase并研究其功能，阐明Sf9细胞凋亡信号传导途径，解决困扰该领域科学家的问题。

.　　草地贪夜蛾卵巢细胞 （Sf9）是昆虫细胞和杆状病毒凋亡相关研究最常用细胞。遗憾的是，Sf9细胞凋亡信号传导途径仍不清楚，Sf9中caspase的鉴定是该问题的瓶颈。虽然有多项研究表明Sf9中还有上游caspase，但是，在本项目开始时，其下游Sf-caspase-1是Sf9中唯一被鉴定的caspase。本项目拟鉴定出Sf9中新的caspase并研究其功能，为全面研究Sf9细胞中凋亡信号的传导途径奠定基础。.　　本项目研究成功从草地贪夜蛾卵巢细胞中鉴定了两个新的caspases ；构建其原核表达质粒，并在大肠杆菌中成功表达；确定了其最适底物；预测了其活性位点和切割位点；研究了其对Sf-caspase-1的作用，证明本项目所鉴定的两个caspase均能在体外切割Sf-caspase-1；在细胞水平证明，本项目所鉴定的两个caspase在Sf9细胞中过表达均能诱导Sf9细胞凋亡、与Sf-caspase-1共转Sf9细胞均能显著激活Sf-caspase-1。.