内源性ghrelin对急性胰腺炎腺泡细胞内钙离子浓度的调节机制研究

Ghrelin是新发现的生长激素促分泌受体的内源性配体，在急性胰腺炎时通过抑制炎症反应、对抗细胞凋亡、促进组织修复等途径发挥保护作用；研究发现ghrelin可调控细胞内钙离子浓度。因此推测内源性ghrelin不仅是机体自身防御部分之一，还可能通过调节细胞内钙离子浓度及钙通道活动参与急性胰腺炎腺泡细胞钙超载的发生。本项目拟研究急性胰腺炎病人血清ghrelin含量与病情严重程度及血钙浓度的关系；通过化学药物（激活剂和抑制剂）及基因工程技术（基因转染和siRNA）调控内源性ghrelin的活性，采用激光共聚焦显微镜和膜片钳技术检测腺泡细胞内钙离子浓度及钙通道活动，探讨内源性ghrelin和腺泡细胞钙离子浓度变化及组织损伤、炎症反应等的关系。通过临床研究、动物模型及细胞水平等三个层面研究内源性ghrelin对急性胰腺炎腺泡细胞内钙离子浓度的调节机制，为进一步阐明急性胰腺炎的发病机制奠定基础。

研究背景：Ghrelin是新发现的生长激素促分泌受体的内源性配体，在急性胰腺炎时通过抑制炎症反应、对抗细胞凋亡、促进组织修复等途径发挥保护作用；已有的研究发现ghrelin可调控细胞内钙离子浓度，推测内源性ghrelin不仅是机体自身防御部分之一，还可能通过调节细胞内钙离子浓度及钙通道活动参与急性胰腺炎腺泡细胞钙超载的发生。.主要内容：本项目分别通过研究内源性ghrelin在不同严重程度的急性胰腺炎病人病程中的动态变化及其与疾病严重程度的关系；胆胰管逆行注射牛磺胆酸钠制作大鼠ANP后，采用生长激素释放肽-2激活ghrelin作用受体，以探讨ANP的病程中内源性ghrelin的作用变化对钙通道蛋白表达和炎症因子生成的影响；以及构建ghrelin过表达和敲减细胞株，测定细胞内钙离子浓度和钙离子通道蛋白表达等方面对内源性ghrelin表达变化在调节腺泡细胞内钙离子浓度及钙通道表达中的作用进行探讨。.主要结果：①AP患者血清ghrelin水平随发病时间上升，与患者代谢状态相关；②ANP大鼠血清ghrelin水平、胰腺组织ghrelin和GHSR的表达均显著增加，与血清IL-1β、胰腺炎症细胞浸润程度及胰腺病变严重程度呈正相关；采用GHRP-2干预可降低ANP大鼠的血清IL-1β、提高血清ghrelin水平，但对胰腺病理损伤无影响；③雨蛙肽刺激能引起AR42J细胞中ghrelin mRNA和蛋白表达水平升高，同时多种炎症因子，钙通道基因表达以及[Ca2+]i升高，而脂多糖刺激对AR42J细胞则无相应的改变；靶向抑制AR42J细胞内ghrelin基因的表达可以上调细胞内炎症因子的表达同时减轻细胞内钙离子浓度水平；进而构建稳定ghrelin过表达和敲减的AR42J细胞系，发现ghrelin过表达的细胞内Cav1.2、Cav2.1、Cav2.2蛋白表达水平升高；相反，ghrelin敲减后AR42J细胞内Cav1.2、Cav2.1、Cav2.2蛋白表达水平下降；同时ghrelin过表达之后细胞中钙离子浓度增加，相反ghrelin敲减后胞内钙离子浓度下降。.主要结论：内源性ghrelin作为机体自身防御机制的一部分，可初步反映与疾病发展以及机体代谢状态，其作用受体激活后可改善机体的炎症状态，并能通过调节细胞内钙离子浓度及钙通道活动在急性胰腺炎腺泡细胞钙超载的发生中发挥重要作用。