Qnr基因在幽门螺杆菌对左氧氟沙星耐药中的作用研究

Helicobacter pylori(Hp) infections now are considered as infectious diseases.Levfloxacin(LEV), a quinolone, is used for eradiction of Hp recent years. Resistance of H.pylori to Levofloxacin is increasing. And it is a main reason for the failure of eradication of H.pylori. Recent studies of LEV resistance mainly focused on mutantion of chromogene which cannot explain all of the LEV resistance conditions. Qnr-meidated resistance has been proved in some Gram-negative bacterial's resistance mechanism.Our study will collect endoscopy specimens, isolat H.pylori, detect minimal inhibitory concentrations(MIC) of H.pylori to LEV by agar dilution and E-test. Sequencing after PCR using gryA primers and qnr primers to compare mutations of gyrA gene in qnr-positive strains. Screening qnr gene or homologous gene and then transfering qnr gene into LEV sensitive H.pylori by Hp/E.coil shuttle plasmid pHe13 , detecting MICs and comparing the changes of MICs before and after connection test.This research plans to make an expression of qnr gene in LEV sensitive strains and then compare the MICs before and after connection test.The aim is to explore a new mechanism of H.pylri resistance to H.pylori and support clinical medication for eradication of Hp infections.

幽门螺杆菌（Hp）对左氧氟沙星的耐药率逐年升高。是Hp根除治疗失败的主要原因之一。目前关于Hp对左氧氟沙星耐药的机制主要集中在染色体基因突变方面，但其不能完全解释其耐药机制。据研究在很多革兰阴性菌中存在qnr基因介导的喹诺酮类抗生素耐药。我们前期工作发现，Hp中也存在qnr基因。本研究拟通过收集临床标本，分离培养出Hp，通过琼脂稀释法和E-test检测各菌株最低抑菌浓度（MIC）。对比选择左氧氟沙星敏感菌和耐药菌质粒DNA中可能的qnr或同源基因；并将此基因通过Hp/大肠杆菌穿梭shuttle质粒pHe13接合到左氧氟沙星敏感菌中，对比接合前后细菌MIC数值、gyrA基因突变点的变化，明确质粒中qnr基因介导的耐药机制在Hp对左氧氟沙星耐药中的作用，深入了解Hp对左氧氟沙星的耐药机理，为克服其耐药性、根除Hp感染提供理论依据。该课题关于幽门螺杆菌qnr基因相关耐药机制的研究国内外少见报告。

幽门螺杆菌对左氧氟沙星的耐药率逐年升高，是幽门螺杆菌根除治疗失败的主要原因之一。目前关于幽门螺杆菌对左氧氟沙星的耐药机制主要集中在染色体基因突变方面，但其不能完全解释其耐药机制。据研究在很多革兰阴性菌中存在QNR基因介导的喹诺酮类抗生素耐药。我们前期工作发现，幽门螺杆菌中存在QNR基因，并且左氧氟沙星耐药降低了左氧氟沙星三联疗法及左氧氟沙星铋剂四联疗法的H. pylori根除疗效。据此，我们拟通过进一步的系列临床和基础研究，明确含左氧氟沙星的铋剂四联疗法的疗效、左氧氟沙星耐药对疗效的影响，深入了解幽门螺杆菌对左氧氟沙星的耐药机理及临床意义，为克服其耐药性、根除幽门螺杆菌感染提供理论依据。国内外目前关于这方面的报道少见。主要研究内容：招募H. pylori根除初次失败患者，给予14天疗程的兰索拉唑、枸橼酸铋钾、左氧氟沙星、阿莫西林四联疗法，观察疗效、安全性及左氧氟沙星耐药的影响。同时收集临床标本，分离培养出幽门螺杆菌，通过琼脂稀释法和E-test检测各菌株最低抑菌浓度，对比选择左氧氟沙星敏感菌和耐药菌质粒DNA中可能的qnr或同源基因；将此基因通过Hp/大肠杆菌穿梭质粒pHe13结合到左氧氟沙星敏感菌中，对比结合前后细菌MIC数值、gryA基因突变点的变化。重要结果关键数据及科学意义：含左氧氟沙星铋剂四联疗法的H. pylori根除率按意向性治疗分析（ITT）为83%（95% CI 75.9-88.3%），按方案分析（PP）为85.4%（95%CI 78.5-90.3%）。左氧氟沙星四联疗法对左氧氟沙星耐药菌株的根除率低于敏感菌株（61.1% vs 100%，p<0.001）。左氧氟沙星四联疗法的不良反应率极低（5%）。当耐药率低于12%时，含喹诺酮的14天四联疗法根除幽门螺杆菌效果非常好。联合使用铋剂，可使左氧氟沙星耐药患者的根除率提高25%。.左氧氟沙星耐药H.pylori中qnr质粒检出率为20/50，敏感菌中为8/50。H.pylori对左氧氟沙星的耐药存在可能的多种机制，因此耐药菌及敏感菌中均可提取到质粒。但耐药菌中质粒的提取率高于敏感菌，质粒介导的左氧氟沙星耐药是其中重要的一部分。琼脂稀释法和E-test筛选出H.pylori菌株MIC值并与接合实验前MIC值进行比较发现，接合前后MIC值变化并不明显。