SRSF3介导的剪接变体CCDC50S促进肝细胞癌浸润转移的机制研究

Tumor invasion and metastasis are the main causes of poor prognosis of hepatocellular carcinoma(HCC). Alternative splicing has been implicated in the malignant progression of HCC. Our preliminary data showed that the expression of splice variant CCDC50S was increased in HCC, and associated with poor prognosis. CCDC50S was regulated by SRSF3 whose cellular expression was modulated by HBx. Furthermore, CCDC50S silence inhibited the proliferation and migration of HCC cells. RNA-sequencing results showed that CCDC50S was involved in Ras signal pathway. Therefore, we assume that splice variant CCDC50S, regulated by HBx-mediated SRSF3, promotes HCC progression via Ras signaling. In this study, we aim to determine the expression and clinical significances of CCDC50S and SRSF3 in HCC, to disclose the mechanism through which SRSF3 modulates CCDC50S, and to explore the role of HBx/SRSF3/CCDC50S in cell proliferation and migration in HCC. Our study is likely to provide not only the reliable evidence of CCDC50S involved in the malignant process of HCC, but also a promising therapeutic target.

侵袭转移是肝细胞癌（HCC）预后差的主要因素。研究表明可变剪接调节基因表达和蛋白多样性，参与HCC恶性进展，但调控机制不清楚。我们前期发现剪接变体CCDC50S在HCC中高表达，与患者预后差相关；其表达受剪接因子SRSF3调控，而SRSF3细胞内定位受HBx影响；沉默CCDC50S作用于Ras信号通路，抑制HCC细胞增殖迁移。因此，我们提出CCDC50S受HBx介导的SRSF3调控，促进HCC浸润转移的假说。本项目拟采用一系列分子细胞生物学实验，利用多种细胞和动物模型，在细胞功能及蛋白表达调控上，明确CCDC50S和SRSF3在HCC中的表达及临床意义，探讨HBx对SRSF3的调控作用，揭示SRSF3调控CCDC50S的机制，阐述HBx/SRSF3/CCDC50S信号轴在HCC进展中的作用，并解析其下游信号传导通路，为诠释HCC发生发展的分子机制和寻找治疗新靶点提供理论依据。

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是最为常见的消化系统肿瘤之一。在中国，80%以上的HCC 由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染所致，其发病率及死亡率均高居第3 位。HCC 患者预后差与肿瘤细胞的快速增殖和转移密切相关，而肿瘤异常生长的主要原因是肿瘤细胞的基因表达失调。作为真核基因表达调控的重要方式，可变剪接是调节基因表达和产生蛋白质组多样性的重要机制。mRNA的异常剪接产生了新的致癌蛋白，是HCC 恶性进展的重要原因。课题组通过分析本中心12对HCC及癌旁新鲜组织的高通量转录组测序，发现CCDC50 pre-mRNA在50％的HCC病例中发生异常剪接，产生CCDC50S和CCDC50L两种剪接变体。在475例HCC临床样本中进行BaseScope检测，定量测定CCDC50S在石蜡组织中的表达，结果表明与肝脏良性肿瘤和其他多种实体肿瘤相比，CCDC50S mRNA在HCC中表达上调，且具有诊断意义（敏感性：0.711，特异性：0.793）。此外，CCDC50S mRNA在HCC中高表达与肿瘤分化程度差、TNM分期晚和患者预后差显著相关。通过体内外实验，课题组发现过表达CCDC50S激活Ras / Foxo4信号通路，并促进HCC生长和转移。抑制MEK / ERK磷酸化或上调Foxo4表达可抑制CCDC50S介导的HCC恶性表型。此外，剪接因子SRSF3直接与CCDC50S mRNA结合，并维持其在细胞质中的稳定性。HBV阳性HCC细胞中，HBx与SRSF3相互作用，并通过14-3-3β把SRSF3滞留在细胞质中。本研究表明HBx/14-3-3β/SRSF3复合物上调CCDC50S表达，CCDC50S激活Ras/MEK/ERK通路促进HCC进展。因此，CCDC50S可作为HCC新的诊断和预后标志物，并成为潜在的HCC的治疗靶点。.在本项目资助下，课题组参与完成了多项基础研究，结果均发表在SCI杂志上，其中项目设计的主体内容发表在胃肠肿瘤顶刊Hepatology (最新影响因子 17.298)，并具有潜在的临床转化价值，支撑项目结题。