外泌体linc00152在前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞间信号传递中的作用及机制研究

Castration-resistant prostate cancer (CRPC) is the final incurable stage of prostate cancer (PCa) after androgen deprivation therapy, enzalutamide (ENZ) is the first second-generation non-steroidal androgen receptor antagonist approved by the the Food and Drug Castration-resistant prostate cancer (CRPC) is the final incurable stage of prostate cancer (PCa) after androgen deprivation therapy, enzalutamide (ENZ) is the first second-generation non-steroidal androgen receptor antagonist approved by the the Food and Drug Administration (FDA) for CRPC treatment. It is only capable of extending survival of CRPC patients by 4–6 months partially due to the development of ENZ resistance. Our previous study found that prostate cancer cell exosomes can transmit ENZ resistance. We found linc00152 is highly expressed in enzalutamide resistant (ENZR) cells and exosomes and knockdown of linc00152 could resensitize ENZR cells to respond to ENZ treatment. Therefore we speculate that exosome-transmitted linc00152 could promote ENZ resistance and progression via interacting with EZH2 in prostate cancer. In the present project, we will further analyze the role of exosome-transmitted linc00152 in the regulation of ENZ resistance and progression, based on two different ENZR models and PCa subcutaneous nude mice model. Overall, our project will clarify the new mechanisms for PCa progression and ENZ resistance.

去势抵抗性前列腺癌（CRPC）是前列腺癌（PCa）经雄激素剥夺治疗后发展的不可治愈的终末阶段，恩杂鲁胺是美国FDA批准的用于CRPC治疗的首个第二代非甾体雄激素受体拮抗剂类药物，虽然它可以延长患者4.8月生存，但最终因耐药导致治疗失败。我们的前期研究发现前列腺癌细胞外泌体可以传递恩杂鲁胺耐药性，linc00152在恩杂鲁胺耐药细胞和外泌体中呈现高表达，并且敲低linc00152后可以增加前列腺癌细胞对恩杂鲁胺的敏感性，而且linc00152可以结合EZH2。因此我们推测linc00152可能通过EZH2传递恩杂鲁胺耐药性并促进前列腺癌细胞恶性进展。本项目将以两种不同的恩杂鲁胺耐药模型、裸鼠皮下瘤模型为研究对象，分析外泌体linc00152对前列腺癌恩杂鲁胺耐药、转移的影响，阐明其在前列腺癌恩杂鲁胺耐药及促进恶性进展的可能的新机制。

前列腺癌（Prostate Cancer，PCa）是全球范围内男性最常见的癌症，近些年来我国 PCa 的发病率和死亡率更是呈现出持续快速增长的趋势。恩杂鲁胺是美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration，FDA）批准用于CRPC治疗的首个第二代非甾体雄激素受体（Androgen Receptor，AR）拮抗剂类药物，它能竞争性结合AR的配体结合域，并且同时可以抑制AR的细胞核转位，而且可以抑制AR协同蛋白及AR与DNA的结合。大量的临床研究结果表明恩杂鲁胺可以使患者显著获益，延长病人生存期限，但由于耐药，仅仅可以延长4-6月。.我们成功建立了2种不同的前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞，并利用高速离心的方法从不同的前列腺癌细胞中提取外泌体，通过电镜、nano sight以及western多种方法验证了提取的外泌体。检测了前列腺癌耐药细胞与敏感细胞共培养后，对恩杂鲁胺的敏感性。通过芯片技术和Q-PCR对前期实验验证过的差异lncRNA进行了扫描，筛选了具有明显变化意义的lncRNA。利用siRNA敲除前列腺癌细胞linc00152，外源性过表达linc00152，观察其对前列腺癌细胞恩杂鲁胺耐药和恶性进展能力的影响。利用RIP实验验证linc00152对蛋白的结合，通过研究得出以下结论：C4-2 ENZR与对照的C4-2 Parental细胞共培养后可以诱导后者对恩杂鲁胺的耐药；利用高速离心方法提取的前列腺癌细胞外泌体可靠且大小数量无明显差异；前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞C4-2 ENZR细胞可以通过外泌体传递恩杂鲁胺耐药及恶性进展能力；RIP实验证实linc00152可以结合EZH2和Vimentin（VIM）调控其表达，并且VIM介导了linc00152诱导的前列腺癌恶性进展能力。.此外我们与其他课题组合作研究前列腺特异性G蛋白偶联受体（PSGR）在PCa的作用中发现：β-ionone/PSGR以依赖于AR的方式抑制PCa细胞的生长；β-ionone/PSGR增加 AR的Ser650 位点的磷酸化抑制AR的入核，从而抑制AR的转录活性；P38与JNK通路介导β-ionone/PSGR所诱导AR的Ser650位点的磷酸化。以上能为PCa的治疗提供新的靶点。