M介导/CpG-ODN激活肿瘤特异性DC生物反应器抗癌作用研究

In the research field of tumor dendritic cell vaccine , it is necessary to improve anticancer activity of the tumor antigen peptide DC vaccine in vivo. Based on our previous work developed a novel carrier M/CpG-ODN modified nano-liposomes, the project intends to use the M/CpG-ODN modified nano liposome-encapsulated tumor antigen peptide to prepare a "M-mediated/CpG-ODN activated tumor-specific DC biological response modifier", then inoculate it into tumor-bearing mice to form the M-mediated/CpG-ODN activated tumor-specific DC bioreactor" by targeting and activating DC in vivo, as well as to explore anti-tumor effect and mechanism of the bioreactor. The bioreactor not only can avoid degradation and dilution of antigen but also can target DC in vivo. Meanwhile, the CpG-ODN of the bioreactor can be used as an adjuvant to activate DC and improve tumor immunosuppressive environment. These features could greatly enhance the anti-tumor effectiveness of the antigen peptide DC vaccine in vivo. This research not only provide new ideas for the development of an ideal tumor antigen peptide carrier but also provide new methodological and theoretical guidance for the tumor antigen peptide DC vaccine, which bring new breakthroughs for the research areas of the carrier system and tumor biotherapy. Therefore this research has important theoretical significance and wide application prospects.

在肿瘤树突状细胞(DC)疫苗研究领域，怎样提高抗原肽DC疫苗在体内抗癌生物活性是拟待解决的难题。基于我们前期工作研制出的新载体M/CpG-ODN修饰纳米脂质体，本项目拟研制M/CpG-ODN修饰纳米脂质体装载肿瘤抗原肽制备成一种"M介导/CpG-ODN激活肿瘤特异性DC生物反应调节剂"，然后将其接种荷瘤鼠靶向活化DC形成体内"M介导/CpG-ODN激活肿瘤特异性DC生物反应器"，探索其体内抗肿瘤作用及机制。该生物反应器不仅可以避免抗原稀释和降解，而且可以实现抗原体内靶向DC，另外,其CpG-ODN可以作为佐剂活化DC，改善肿瘤免疫抑制环境,这必将大大提高肿瘤抗原肽DC疫苗在体内抗肿瘤的有效性。通过上述研究，不仅为研制理想的肿瘤抗原肽载体提供新的思路，而且为肿瘤抗原肽DC疫苗提供新的方法学和理论指导，这将为载体系统和肿瘤生物治疗研究领域带来新的突破，因而具有重要的理论意义和广泛应用前景。

在肿瘤树突状细胞(DC)疫苗研究领域，怎样提高抗原肽DC 疫苗在体内抗癌生物活性是拟待解决的难题。本研究研制负载肝癌H22细胞裂解抗原肽的甘露糖与CpG-ODN共修饰脂质体(M/CpG-ODN-H22-Lipo反应器) 和负载酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)抗原肽的甘露糖与CpG-ODN共修饰脂质体(M/CpG-ODN-TRP2-Lipo反应器) 两种“M 介导/CpG-ODN 激活肿瘤特异性DC 生物反应器”，并进一步探索了其抗肿瘤作用和机制。研究结果表明成功制备出M/CpG-ODN-H22-Lipo反应器，其粒径为130 nm左右，呈球形，表面带负电荷，包封率为52.9%。该反应器能有效靶向DC并使其成熟，在含50%血清的PBS中具有稳定的免疫刺激活性。M/CpG-ODN-H22-Lipo可有效抑制肝癌小鼠肿瘤生长并延长其生存时间，降低肿瘤局部与骨髓中MDSC以及脾脏中Treg的数量，提高脾脏中IFN-γ阳性细胞的频率，抑制肝癌小鼠体内肿瘤血管生成及肿瘤细胞增殖，并促进肿瘤细胞凋亡。进一步研究发现经M/CpG-ODN-H22-Lipo治疗后，肝癌小鼠血清IgG水平升高，CD8+ T细胞与NK细胞是M/CpG-ODN-H22-Lipo在体内发挥抗肝癌作用的主要效应细胞。另外，本研究进一步成功制备出M/CpG-ODN-TRP2-Lipo反应器，其粒径为100 nm左右，呈球形，表面带负电荷，包封率为60.8%。该反应器能有效抑制黑色素瘤小鼠的肿瘤生长并延长其生存时间。可降低黑色素瘤小鼠肿瘤局部、骨髓以及脾脏中MDSC的数量，降低脾脏中Treg的数量，升高IFN-γ阳性细胞以及TRP2肽特异性CD8+ CTL的频率；有效抑制肿瘤组织血管生成、抑制肿瘤细胞增殖并促进肿瘤细胞凋亡。ISTS法检测结果显示经M/CpG-ODN-TRP2-Lipo治疗后肿瘤局部有TRP2肽特异性CD8+ CTL聚集。进一步研究表明M/CpG-ODN-TRP2-Lipo的抗黑色素瘤作用与MyD88信号转导通路相关。通过上述研究，不仅为研制理想的肿瘤抗原肽载体提供新的思路，而且为肿瘤抗原肽DC疫苗提供新的方法学和理论指导，这将为载体系统和肿瘤生物治疗研究领域带来新的突破，因而具有重要的理论意义和广泛应用前景。