大菱鲆吸收利用小肽的分子机制

小肽作为蛋白质的主要消化产物，在氨基酸消化、吸收和代谢中起着重要作用。小肽转运载体PepT1在动物吸收利用小肽的过程中发挥关键作用。本研究拟运用分子生物学方法克隆大菱鲆PepT1基因，研究其在大菱鲆消化系统各组织的表达分布，采用生物信息学技术分析大菱鲆PepT1氨基酸序列和结构域组成；结合经典生长实验，选用遗传背景相同的大菱鲆幼鱼，研究饲料小肽含量对大菱鲆生长性能及蛋白利用的影响，探讨大菱鲆对饲料中小肽的利用能力和特点；利用实时荧光定量PCR和western免疫印迹技术，在基因表达、蛋白表达和生化活性三个不同的水平系统研究饲料中小肽对大菱鲆肠道小肽转运载体PepT1的影响，确定小肽对PepT1活性的调控水平，探讨影响小肽吸收的因素，探索大菱鲆对小肽吸收利用的分子机制；为科学合理地利用小肽，配制高效环保的饲料，提高鱼类对饲料蛋白质的利用具有重要的理论意义。

小肽作为蛋白质分解产物吸收的主要形式，对动物机体具有重要的生物学意义。小肽转运载体PepT1在动物吸收利用小肽的过程中发挥关键作用，对小肽转运载体基因的研究有利于进一步了解小肽的吸收机制。 本研究完成了大菱鲆PepT1基因的克隆，研究了其在大菱鲆消化系统各组织的表达分布，采用生物信息学技术分析了大菱鲆PepT1氨基酸序列和结构域组成；构建了大菱鲆半同胞家系，结合经典营养学生长实验，研究了饲料小肽含量对大菱鲆生长性能及蛋白利用的影响，探讨大菱鲆对饲料中小肽的利用能力和特点；在保证实验鱼遗传背景一致的前提下，利用实时荧光定量PCR和western免疫印迹技术，系统研究了饲料中小肽对大菱鲆前肠小肽转运载体PepT1基因和蛋白表达的影响，探讨了大菱鲆对小肽吸收利用的分子机制；为科学合理地利用小肽，配制高效环保的饲料，提高鱼类对饲料蛋白质的利用具有重要的理论意义。. 主要研究成果包括三方面：1）获得了全长为2629bp的大菱鲆PepT1 cDNA序列，编码860个氨基酸；大菱鲆小肽转运载体PepT1表达主要在消化道、肝脏和鳃，实时荧光定量PCR检测PepT1表达量最高的三个组织依次是前肠>中肠>幽门盲囊。2）研究了大菱鲆幼鱼对饲料中小肽的利用能力，高植物蛋白饲料中适量添加富含小肽的水解鱼蛋白可以达到与高鱼粉饲料配方相近的养殖生长效果，但是饲料中过高水平的小肽会抑制大菱鲆的生长和饲料蛋白利用。3）探明了饲料中小肽含量对大菱鲆肠道PepT1基因表达和蛋白表达的影响。