滤泡辅助性T细胞在寻常型天疱疮自身抗体产生中的作用及其机制研究

Pemphigus Vulgaris(PV) is a life-threatening autoimmune blistering disorder caused by specific-Dsg3 IgG autoantibodies. B cell maturation and antibody production need the activating signal from T cells. Recently, the identity of a discrete follicular population of T cells that has a crucial role in this process has become clearer. Owing to their distinct homing preferences and helper function , these T cells differ from T helper 1 and T helper 2 cells and have been denoted follicular helper T cells(Tfh) with IL-21 expression. Meanwhile, Interleukin(IL)-4 production by Th2-like Tfh cells regulates IgG isotype class switching. From our previous data, the Dsg3-IgG isotypes were correlated to the disease activity，IL-21 expression was elevated in PV patients' sera，CD4+ T cells could help B cells to produce specific antibody in vivo. In this study, we will focus on the role of Tfh in B cell activation, antibody production and its underlying mechanisms, further to investigate new therapeutic targets.

特异性天疱疮抗体是寻常型天疱疮（PV）发病的病理生理基础。以往认为Th2细胞是辅助B细胞产生抗体的主要T细胞亚群，近年来研究发现滤泡辅助性T细胞（Tfh）可通过产生IL-21对B细胞的成熟、活化、产生抗体起到重要的作用，其功能异常可导致B细胞异常激活，产生大量自身抗体；而Th2型Tfh细胞分泌的IL-4与抗体亚型的转化至关重要。本课题组在以往的研究中发现PV患者特异性抗体亚型和疾病的活动密切相关，可作为严重度和预后判定的指标；患者血清中IL-21含量显著升高；动物实验亦证实B细胞产生抗Dsg3抗体需要CD4+T细胞的辅助。本研究拟在前期工作的基础上从临床和实验两方面对Tfh及其亚群细胞、效应分子在PV抗体产生中的作用进行序贯性研究，进一步阐明天疱疮的发病机制；并通过免疫干预的手段对其作用过程中的关键分子进行阻断，从而寻找疾病治疗的新靶点。

目的 研究滤泡辅助性T细胞（TFH）在天疱疮发病机制中的作用。 方法 收集天疱疮，采用流式细胞术检测患者外周血、皮损中CD4+T细胞及CD4+ CD45RA- 活化T细胞中的TFH的比例（CXCR5+PD-1+），和健康对照进行比较；分析部分患者治疗前后TFH的变化情况；并进一步对活化TFH和特异性抗Dsg1、Dsg3抗体滴度的相关性进行研究。构建天疱疮小鼠动物模型，观察天疱疮小鼠中TFH的变化和可能作用。 结果 初发、稳定期和复发的天疱疮患者外周血滤泡辅助性T细胞占CD4+T细胞及活化T细胞的比例均显著高于健康对照组（P<0.0001），且初发患者的TFH（0.88±0.80）%明显高于稳定期患者[（0.28±0.23）%，P<0.0001，U=448.5]，初发患者TFH占CD4+ CD45RA-活化T细胞的比例（0.99±0.88）%高于稳定期患者（0.36±0.28）%，差异有统计学意义（P=0.0004，U=431.5）。复发患者的TFH占CD4+ CD45RA-活化T细胞的比例（0.62±0.49）%明显高于稳定期患者（0.36±0.28）%，有统计学差异（P=0.0004，U=418.5）。治疗后患者的TFH明显下降，在活化T细胞中的比例下降更加明显。天疱疮患者外周血CD4+ CD45RA-活化TFH与抗Dsg3抗体滴度呈微弱正相关（R=0.285，P=0.004）。天疱疮皮损中TFH的比例较正常人下降。 结论 天疱疮患者外周血TFH明显升高，与疾病的活动度有关，活化T细胞中TFH的比例变化更为敏感，可作为疾病活动度和疗效的评判指标。