视网膜光凝促进人视网膜前体细胞移植供体细胞移行与整合的作用及机制

视网膜变性疾病尚无有效治疗方法。视网膜干细胞移植是治疗该病最具潜力的方法之一。体外扩增能力和与受体的整合能力不足是目前面临的主要挑战。我们的初步结果显示，视网膜光凝能够明显提高供体细胞的移行及整合能力。另外，人视网膜前体细胞转染c-mycERTAM基因后体外扩增能力显著提高。本项目拟采用免疫化学和生物学技术进行以下研究：①视网膜光凝提高供体细胞移行及整合的作用及机制；②人视网膜前体细胞转染c-mycERTAM基因的安全性评价及与体外扩增能力及分化的关系；③将扩增的前体细胞移植到行视网膜光凝的猪视网膜下腔，研究供体细胞移行及整合与视网膜光凝所致的基质金属蛋白酶表达改变的关系。该研究将有助于阐明视网膜光凝所致的基质金属蛋白酶表达增加是促进供体细胞移行及整合的作用机制之一；转染c-mycERTAM基因促进人视网膜前体细胞扩增的安全性和有效性，为视网膜干细胞移植提供进一步的理论依据和技术方法。

视网膜变性疾病所致的视网膜感光细胞死亡是导致不可逆性视功能丧失的主要原因之一，目前尚无有效治疗方法。视网膜干细胞移植是治疗该病最具潜力的方法之一。供体细胞来源有限和与受体的整合能力不足是目前面临的主要挑战。.本项目的主要研究内容包括：1. 视网膜光凝提高供体细胞移行及整合的作用及机制；2. 人视网膜前体细胞转染c-mycERTAM 基因的安全性评价及与体外扩增能力及分化的关系；3. 将扩增的前体细胞移植到行视网膜光凝的猪视网膜下腔，研究供体细胞移行及整合与视网膜光凝所致的基质金属蛋白酶表达改变的关系。.本研究发现从人胚胎眼球分离的视网膜前体细胞能够在体外培养扩增，同时表达视网膜干细胞标记物，Nestin, Ki-67, PAX6, Crx; 促分化培养后表达视网膜感光细胞标记物Recoverin，Rhodopsin, Opsin等。视网膜光凝能够显著提高视网膜基质金属蛋白酶的表达，进而促进其作用底物的分解。同时，视网膜光凝能够显著提高视网膜前体细胞移植后的供体细胞的移行及整合。转染c-mycERTam基因的hRPCs的体外扩增能力显著增强，改善了hRPC的增殖动力学。将体外扩增的hRPCs移植到行视网膜光凝的小鼠及小型猪视网膜下腔，发现移植的hRPCs能够存活并整合到视网膜外核层，部分供体细胞表达视网膜光感细胞标记物。未发现小鼠及小型猪视网膜下腔移植体外扩增的人视网膜前体细胞后有肿瘤形成。移植后使用免疫抑制剂能够提高供体细胞的成活率。口服免疫抑制剂无明显副作用。移植组与单纯视网膜光凝观察组行mfERG检查，未发现明显差异。.该研究阐明了视网膜光凝所致的基质金属蛋白酶表达增加是促进供体细胞移行及整合的作用机制之一；转染c-mycERTAM 基因能够促进人视网膜前体细胞体外扩增；为视网膜干细胞移植提供进一步的理论依据和技术方法。