蠲痛饮对子宫内膜异位症TRL4/NF-κB信号通路调控机制的研究

Endometriosis is a common disease of women of childbearing age, dysmenorrhea, chronic pelvic pain, pelvic adhesions and infertility and other features, though it is a benign disease, but with the proliferation of planting, recurrent, and metastaticseriously affect the health and quality of life of patients.Abnormal transcription of TLR4 / NF-kappa B signaling pathway nucleus plays an important role in the development of EMs occurred.Guidance on the basic theory of Traditional Chinese medicine theory, the endometrial stromal cells (ESC) cultured in vitro, to impose the exact clinical efficacy the Juan swig of drug serum by RT-PCR and by Western blot analysis of TLR4, NF-kappa B, IL-1, IL-12, TNF-αmRNA in, and protein expression, application of gel electrophoresis mobility shift assay (EMSA) to detect NF-κBDNA-binding capacity, monitoring and analysis of DNA flow cytometry cycle and apoptosis analysis of ESC proliferation abilitysignaling pathway in TLR4/NF-κB ESC after the clear role of Juan swig drugs serum for Chinese medicine, prevention and treatment EMs provide new ideas and provide a good entry point to clarify the mechanism of Chinese medicine with modern scientific theories.

子宫内膜异位症是育龄妇女的常见疾病,以痛经、慢性盆腔疼痛、盆腔粘连和不孕等为特点，虽是一种良性疾病,却具有增殖性、种植性、复发性和转移性，严重影响患者的健康和生活质量。TLR4/ NF-κB信号通路核内异常转录介导在EMs发生发展中具有重要地位。本研究以中医理论为指导，体外分离培养子宫内膜间质细胞（ESC），施以临床疗效确切蠲痛饮药物血清, 采用RT-PCR 法以及Western blot法检测TLR4、NF-κB、IL-1、IL-12、TNF-αmRNA和蛋白表达，应用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测NF-κBDNA-结合能力，流式细胞仪监测和分析DNA周期和细胞凋亡，分析ESC 增殖能力，以明确蠲痛饮药物血清作用ESC后TLR4/NF-κB 信号通路的影响，以期为中医药防治EMs提供新思路，为用现代科学理论阐明中医药作用机理提供一个良好的切入点。

本研究采用电镜、流式细胞仪、RT-PCR、Western blot、EMSA等现代生物技术，体外分离培养子宫内膜间质细胞（ESC），施以临床疗效确切蠲痛饮药物血清, 研究阐明了:（1）透射电镜观察蠲痛饮含药血清抑制了ESC的能量代谢和分泌功能，促进异位内膜细胞的凋亡，使细胞固缩，腺体萎缩；.（2）CCK-8法检测蠲痛饮含药血清能抑制ESC的增殖，以高剂量组抑制最明显；.（3）流式细胞仪检测蠲痛饮药物血清各浓度组均能促进在位内膜间质细胞早期凋亡，且随时间和浓度的增加效果更佳明显；.（4）蠲痛饮含药血清可诱导ESC停止在G1期，抑制细胞的增殖，促进细胞凋亡，细胞早期凋亡率随药物浓度及时间的延长而增高。.（5）蠲痛饮含药血清能够降低ESC中TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA的表达，其中，蠲痛饮高剂量组在降低作用最显著；.（6）蠲痛饮含药血清能够降低ESC中TLR4、NF-κB、IL-1β蛋白的表达，经 NF-κB 抑制剂 PDTC 干预后，TLR4蛋白表达量明显升高；NF-κB、IL-1β蛋白表达量明显降低。而在PDTC基础上加入中药高剂量组含药血清后， TLR4蛋白表达量明显降低；而NF-κB、IL-1β蛋白表达量降低不明显。.（7）应用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测蠲痛饮高剂量组可抑制NF-κB DNA-结合能力，加入PTDC干预后，进一步抑制NF-κB DNA-结合能力。.蠲痛饮含药血清能够降低 ESC 中TLR4/NF-κ B 信号通路的TLR4、NF-κB、IL-1β的基因、蛋白的的表达抑制 ESC 的增殖，从而抑制异位内膜的存活、黏附和增殖，进而达到治疗 EMS 的目的，为中医药防治 EMs 提供新思路，以及用现代科学理论阐明中医药作用机理提供一个良好的切入点。