纳米脂质颗粒ApoE-rHDL靶向调控MDSCs重塑免疫微环境在胶质母细胞瘤免疫治疗中的作用与机制研究

Remodeling tumor microenvironment and activating normal immunity is a new direction of glioblastoma immunotherapy. ApoE may ameliorate immunodeficiency of glioma by MDSCs target binding. However, ApoE have three different isomers which have different or even opposite effects. Besides, the internal delivery of ApoE is still a conundrum. This project will further study the correlation of ApoE gene polymorphism and glioblastoma. We synthesize the targeting biomimetic lipid nanoparticle ApoE（2/3/4）-rHDL, test the regulating role to immuno microenvironment and therapeutic effect on glioma model, and investigate the mechanism of ApoE (x) -rHDL targeting regulation of MDSCs by MACS, cell apoptosis, immunofluorescence, qRT-PCR and Western blot. It is the first time we study the correlation of ApoE phenotypes and immune microenvironment of glioblastoma. These studies, with the help of nano-targeted drug delivery technology, provide a new perspective for understanding the remolding of immune microenvironment by different isomers of ApoE through the regulation of MDSCs, and reveal a new idea for the immunotherapy of glioblastoma.

重塑肿瘤微环境，激活机体正常免疫是胶质母细胞瘤免疫治疗的新思路。载脂蛋白E（ApoE）可以通过靶向结合MDSCs逆转胶质瘤的免疫缺陷。然而，ApoE的三种不同异构体有不同甚至于相反的作用，且其体内靶向递送是个难题。本研究拟探讨ApoE基因多态性与人脑胶质母细胞瘤的相关性，分别通过构建、表征基于ApoE三种不同异构体的仿生纳米脂质颗粒ApoE（2/3/4）-rHDL，验证其对免疫微环境的调控作用及对大鼠脑胶质瘤模型的治疗效果；还将采用细胞分选、细胞凋亡、免疫荧光、qRT-PCR及蛋白印迹等技术，力求对目的纳米颗粒ApoE（x）-rHDL靶向调控MDSCs的关键信号通路和蛋白等作用机制进行阐明。该研究首次将胶质母细胞瘤中ApoE的不同表型与免疫微环境联系起来，并通过纳米靶向递药技术为理解ApoE的不同异构体通过调节MDSCs重塑免疫微环境提供了新的视角，为胶质母细胞瘤的免疫治疗提供了新的思路。

重塑肿瘤微环境，激活机体正常免疫是胶质母细胞瘤免疫治疗的新思路。载脂蛋白E（Apo E）可以通过靶向结合MDSCs逆转胶质瘤的免疫缺陷。然而，ApoE的三种不同异构体有不同甚至于相反的作用，且其体内靶向递送是个难题。因此，我们拟通过构建纳米药物的策略实现脑内靶向递送，且验证其在体内外对胶质瘤细胞的杀伤作用，并探讨其对免疫微环境的调控作用。本课题成功构建了负载ApoE4的靶向纳米颗粒ApoE-LND@Car，平均粒径145nm，分散性和稳定性良好，且具有明显的缓释特点。MTT显示，与对照组相比，ApoE-LND@Car表现出更强的抑制肿瘤细胞增殖的能力，呈剂量依赖性。我们构建了体外BBB模型，评价纳米粒的穿透性，结果显示ApoE-LND@Car能够透过BBB且被肿瘤细胞摄取。为了评估体内分布和药效，我们建立了小鼠原位胶质瘤模型，体内分布研究显示，经ApoE4修饰的纳米粒能更快的富集于颅内病灶处。生存分析显示，经ApoE-LND@Car治疗的小鼠中位生存期明显延长，生存质量更高。对免疫微环境研究表明，ApoE-LND@Car降低了M-MDSC在脑部的累积，显著增加了CD3+ CD8+T细胞的浸润，逆转了胶质瘤的免疫抑制微环境。总之，本课题为胶质瘤的治疗提供了一条新思路。