RSK4 对胰腺上皮细胞恶性转化、侵袭转移以及凋亡的影响

核糖体S6激酶(ribosomal S6 kinase, RSK)是重要的细胞外信号调节激酶，对细胞恶性转化、细胞凋亡等多种细胞功能产生影响。RSK包括4个成员，其中RSK4的生物学功能尚不明确。前期研究发现：RSK4在多种人类正常组织和胰腺导管上皮细胞中高表达，而在胰腺癌细胞系中普遍低表达或不表达，提示RSK4可能是一个抑癌基因；对RSK4进行克隆和测序发现，RSK4在两个不同位点进行选择性剪接从而产生四种基因变异型和蛋白异构体，各个变异型的生物学功能可能存在差别。为验证以上发现，本项目将通过基因敲除和转染方法在体外细胞实验以及体内裸鼠实验研究内源性RSK4 和外源性RSK4各变异型的生物学特性：①对胰腺导管上皮细胞恶性转化的影响；②对胰腺癌细胞浸润和转移的影响；③对胰腺癌细胞周期、凋亡的影响。研究结果将进一步阐明RSK4在胰腺癌的发生、发展中的作用，为寻找胰腺癌诊疗的新靶点开辟新途径。

本课题组前期研究发现核糖体S6激酶（RSK）成员之一RSK4可能是抑癌基因。为进一步阐明RSK4在胰腺癌发生发展中的作用，本研究首先用PCR和免疫组化检测人胰腺癌标本RSK4 mRNA和蛋白表达。发现RSK4蛋白在胰腺癌、内分泌肿瘤、胰岛素瘤、慢性炎症、正常组织的阳性表达率分别为90.40%、100.00%、27.27%、33.33%、16.67%，RSK4 mRNA在胰腺癌相对表达量为5.221±10.5，癌旁为5.134±9.6，两者无明显差异，与原有报道不相应。. 在探讨RSK4在胰腺上皮细胞恶性转化中的作用发现，完整mRSK4或hRSK4 cDNA瞬时转染MB231,BxPC3和Hela细胞，活细胞数量明显减少；完整的RSK4表达能明显增加亚-G1期细胞凋亡数、能减少软琼脂中克隆数形成；用表达完整hRSK4序列的L3.6pL细胞接种SCID小鼠，所形成的移植肿瘤生长速度慢于表达空载体对照组；接种表达ΔE21变异型的细胞形成的移植瘤生长速度比完整hRSK4组快；接种表达完整hRSK4的AsPC-1细胞诱导的移植肿瘤生长速度与表达空载体组比较无明显差别；接种表达ΔE21的细胞诱导的肿瘤生长速度比接种hRSK4组慢。. 在实验研究过程中发现细胞周期蛋白的表达对肿瘤细胞对化疗药物的敏感性有明显影响。我们对此进行了较深入的研究，概括为：过表达细胞周期蛋白cyclinD1能够增强人乳腺癌细胞系MCF7对抗肿瘤药物的敏感性，而在细胞系MB231中其作用相反，这些作用在一定程度上需要其依赖性激酶CDK4参与协调，但并非其在传统的细胞周期中结合并激活CDK4/6激酶起到感应和启动作用相同的信号通路。此外还发现，cyclinD1在肿瘤细胞对抗肿瘤药物细胞毒性作用的反应中的调节作用是依细胞类别，细胞本身的信号通路特点及药物的作用靶点和作用机理密切相关，相互影响。. 巨噬细胞是一种异质性细胞群体，在不同微环境中表现不同的活化状态，被赋予明显不同的功能。Ml型巨噬细胞通过参与正向免疫应答发挥抗肿瘤功能，而M2型下调免疫应答，介导病原体和肿瘤的免疫逃逸。在非小细胞肺癌组织的肿瘤内以M2型巨噬细胞为主，在癌旁肺组织以Ml型为主。且两型细胞相关蛋白表达与肿瘤分期及预后相关，提示在肿瘤发展过程中，肿瘤巨噬细胞的类型发生了改变：肿瘤早期，巨噬细胞以Ml型为主，而在晚期，以M2型为主。