基于连接酶激活型探针的信号放大技术分析血液中循环癌细胞的新方法研究

This research project seeks to develop a novel method for detection of circulating tumor cells (CTCs) from blood using ligase-activatable probe. The ligase-activatable probes composed of antibodies conjugated with oligonucleotides bind to the special target antigen on CTCs, then connector oligonucleotides hybridize with two oligonucleotides that have bound with the the same target antigen and new long DNA strands are joined by added ligase for ligation. Subsequently, the new DNA strands, as the ligation products, can be amplified and assayed by real-time PCR. Unlike other DNA-based detection methods, this method thus requires proximal binding by two or more detection reagents for signal generation, a mechanism that serves to improve both the specificity and sensitivity of detection. As described below, this basic mechanism can also be varied extensively to meet other requirements for cells detection.

本课题旨在建立一种基于连接酶激活型探针分析检测血液中循环癌细胞（CTCs）的新方法。该方法利用一对亲和探针对CTCs 上特异抗原进行双识别，在连接子和连接酶的作用下因接近连接形成新的DNA 链，继而产生可通过实时荧光PCR 扩增而得到可检测德尔荧光信号，从而实现对CTCs 的检测。这种方法的最大特点在于它同时具备了实时定量PCR 的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。它将对细胞的抗原的检测转变为对能进行指数扩增的DNA的检测，因此具有极高的检测灵敏度，而邻近连接反应的苛刻条件（双探针必须同时结合到靶标抗原上，且相互间距离足够贴近时，连接反应才能够发生）使得这种方法具有比普通PCR 方法更高的特异性。本课题发展的这种方法为CTCs 的临床分析和检测提供了新的平台，也为肿瘤的早期诊断和治疗开拓了新的思路。

本课题建立一种基于连接酶激活型探针分析检测血液中循环癌细胞（CTCs）的新方法。该方法利用一对亲和探针对CTCs上特异抗原进行双识别，在连接子和连接酶的作用下因接近连接形成新的DNA链，继而产生可通过实时荧光PCR 扩增而得到可检测德尔荧光信号，从而实现对CTCs的检测。这种方法的最大特点在于它同时具备了实时定量PCR的高灵敏度和抗原抗体反应的高特异性。它将对细胞的抗原的检测转变为对能进行指数扩增的DNA的检测，因此具有极高的检测灵敏度，而邻近连接反应的苛刻条件（双探针必须同时结合到靶标抗原上，且相互间距离足够贴近时，连接反应才能够发生）使得这种方法具有比普通PCR方法更高的特异性。本课题发展的这种方法为CTCs的临床分析和检测提供了新的思路。