早产儿内源性肺表面活性物质合成调控新机制：miR-125b-5p的研究

Neonatal respiratory distress syndrome is one of neonatal high-risk diseases. In the previous study, we found that miR-125b-5p was differentially expressed in the lung development and the blood serum of patients with neonatal respiratory distress syndrome. The results of our previous study indicated that miR-125b-5p interacting with STAT3 might play an important role in the synthesis and secretion of pulmonary surfactant proteins and neonatal respiratory distress syndrome through the mechanism of inhibiting the JAK/STAT signal pathway. This study is to elucidate the biological characteristics of the miR-125b-5p and its effect in the synthesis and secretion of pulmonary surfactant proteins and in the JAK/STAT signal pathway by overexpression and knockdown of miR-125b-5p in type Ⅱ alveolar epithelial cells. We also intend to investigate the function and mechanism of miR-125b-5p in neonatal respiratory distress syndrome by studying the JAK/STAT signal pathway. The results of this study have certain creativity and further offer help for the preventiaon and treatment of neonatal respiratory distress syndrome.

新生儿呼吸窘迫综合征（NRDS）是早产儿常见危重症，miR-125b-5p是我们筛选出的一条在肺发育进程及NRDS患儿血清中均差异表达的miRNA。前期研究表明，miR-125b-5p可通过下调STAT3的表达抑制JAK/STAT信号通路，进而导致肺表面活性物质（PS）合成与分泌增加，影响NRDS的发生、发展。本研究拟分析新生鼠肺发育不同阶段miR-125b-5p、PS及JAK/STAT信号分子的表达，评估miR-125b-5p在肺发育中对PS合成的调控作用及其与JAK-STAT信号通路的相关性；应用人工合成miR-125b-5p mimics、inhibitors及amiRNA技术，评估肺泡Ⅱ型上皮细胞合成PS的功效以及JAK/STAT信号通路变化；进一步以JAK/STAT信号通路为干预目标，采用基因过表达和沉默技术，论证miR-125b-5p影响PS合成的JAK/STAT信号转导机制。

新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)是早产儿呼吸衰竭的主要病因，也是导致新生儿死亡的主要原因之一。本项目原计划于2016年在细胞方面初步研究miR-125b-5p对SPs合成及分泌影响的机制，进而得以系统深入研究miR-125b-5p的功能，主要是通过过表达和沉默miR-125b-5p，分析下游SPs的合成情况及下游的相关信号通路重要蛋白PKA、PKC、CaMK的表达及磷酸化水平的情况。实际工作中，我们观察到过表达和沉默miR-125b-5p对SPs合成及分泌的调控作用不明显。但在研究过程中，我们观察到过表达miR-20a对SPs合成及分泌具有明显的调控作用。因此，课题组决定将研究重点转移到对miR-20a调控SPs合成及分泌的研究方面。本研究的第一部分是在Ⅱ型肺泡上皮细胞（AT-Ⅱ）中构建miR-20a-5p的过表达及沉默，对其功能进行验证，从细胞培养层面观察肺表面活性物质（PS）的合成相关蛋白表达水平。第二部分通过生物信息学分析和相关文献检索，我们发现PTEN是miR-20a的潜在靶基因，miR-20a-5p的过表达和沉默导致PTEN的下调和上调，提示miR-20a-5p可能通过靶向调节PTEN的表达来调节肺表面活性物质的合成。第三部分实现沉默及过表达PTEN，观察PTEN对肺表面活性物质合成的影响。